背景[1-3]
細胞劃痕實驗是實驗室分析細胞遷移能力的常用方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。
細胞劃痕實驗及結果分析
實驗步驟：
1.培養(yǎng)板劃線
首先使用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。劃線時注意線不要太粗。
2.接種細胞
在孔中加入約5×105個細胞（不同的細胞數(shù)量有所不同，根據(jù)細胞的生長快慢調(diào)整），接種原則為過夜后融合率達到100%。
3.細胞劃線
24h后用槍頭或者無菌牙簽，垂直與細胞平面，沿著投一天劃在平板背面的線在細胞層上進行劃痕(不同孔之間使用同一只槍頭或牙簽)。
4.清洗細胞
劃痕完成后，使用無菌PBS洗細胞3次，洗去不貼壁的細胞，即劃線時劃線的細胞，是劃線后留下的間隙清晰可見，然后更換新鮮無血清培養(yǎng)基。
5.細胞培養(yǎng)、觀察
將細胞放入37℃5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。然后在適當?shù)臅r間點，如0，6，12，24h取出細胞，顯微鏡線觀察并測量劃痕的寬度，并拍照(具體時間依實驗需要而定)。
6.結果分析
使用Image J軟件打開圖片后，隨機劃取6至8條水平線，計算細胞間距離的均值。
應用[4][5]
用于硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復中的作用研究
1、在自動平臺上制造軟骨細胞劃痕模型。
2、通過劃痕閉合情況，獲得CS促進軟骨損傷修復的濃度。
3、研究硫酸軟骨素和地塞米松對軟骨細胞損傷修復的影響。
方法：1、體外提取、培養(yǎng)原代SD大鼠關節(jié)軟骨細胞，通過細胞形態(tài)學及II膠原免疫熒光染色方法進行細胞鑒定。
2、應用自動平臺制造軟骨細胞劃痕模型。
3、實時監(jiān)測觀察軟骨細胞劃痕的閉合過程。
4、應用計數(shù)有劃痕處固定相等區(qū)域內(nèi)軟骨細胞數(shù)目，確定促進軟骨細胞愈合的硫酸軟骨素（CS）濃度。
5、應用live/dead kit staining方法觀察細胞存活率。
6、應用免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）檢測單純劃痕組、CS組、地塞米松組、CS和地塞米松共同作用組對I型及II型膠原的表達情況。
結果：1、應用自動平臺制造出8通道的劃痕，劃痕具有水平的起點、止點及相同的寬度。
2、濃度為200μg/ml的CS對于軟骨細胞劃痕愈合的促進作用。
3、兩種藥物共同作用時CS可減輕地塞米松對于軟骨細胞增殖的抑制作用，I型膠原表達量較單獨應用地塞米松組減少，II型膠原表達量則增多。
結論：1、硫酸軟骨素對于軟骨細胞劃痕愈合具有促進作用，且在濃度200μg/ml時作用效果。
2、硫酸軟骨素對于糖皮質(zhì)激素引起的軟骨損傷具有修復作用。如臨床應用糖皮質(zhì)激素，可加用硫酸軟骨素保護關節(jié)軟骨。
參考文獻
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[2]Molecular properties and fibril ultrastructure of types II and XI collagens in cartilage of mice expressing exclusively theα1（IIA）collagen isoform[J].Audrey McAlinden,Geoffrey Traeger,Uwe Hansen,Mary Ann Weis,Soumya Ravindran,Louisa Wirthlin,David R.Eyre,Russell J.Fernandes.Matrix Biology.2014
[3]Wound healing gene therapy:cartilage regeneration induced by vascular endothelial growth factor plasmid[J].Katarina Kolostova,Oliver Taltynov,Daniela Pinterova,Michael Boubelik,Otakar Raska,Pavel Hozak,Marie Jirkovska,Vladimir Bobek.American Journal of Otolaryngology--Head and Neck Medicine and Surgery.2012(1)
[4]Culture of bovine articular chondrocytes in funnel-like collagen-PLGA hybrid sponges This work was presented at the International Union of Materials Research Societies（International Conference in Asia）（Qingdao,China,Sep.25–28 2010）.[J].Hongxu Lu,Young-Gwang Ko,Naoki Kawazoe,Guoping Chen.Biomedical Materials.2011(4)
[5]殷貴鯤.硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復中的作用[D].大連醫(yī)科大學,2014.