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磷酸化上皮鈉通Β抗體的應(yīng)用

2021/2/25 11:24:53

背景[1-3]

磷酸化上皮鈉通Β抗體是可以特異性結(jié)合磷酸化上皮鈉通Β蛋白的一類多克隆抗體,主要用于磷酸化上皮鈉通Β蛋白的體外檢測實(shí)驗(yàn)。

磷酸化上皮鈉通ΒELISA檢測示意圖

鈉離子通道是由內(nèi)在膜蛋白形成的離子通道,可以讓鈉離子Na通過細(xì)胞膜。鈉離子通道可以依啟動的方式加以分類,一種是依電壓變化而啟動的(電壓門控型),另一種則是需和其他化學(xué)物質(zhì)(配體)結(jié)合后才啟動的(配體門控型)。

上皮鈉通道(ENaC)是可滲透Na+離子的膜離子通道。它位于腎臟,肺,結(jié)腸和其他組織的上皮的頂質(zhì)膜中,在反式上皮Na+離子轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮作用。具體而言,通過ENaC的Na+轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生在許多上皮表面,并且在調(diào)節(jié)鹽和水的吸收中起關(guān)鍵作用。

ENaC由三個結(jié)構(gòu)相關(guān)的亞基組成,形成一個四聚體通道A,B和γ。隨著角質(zhì)形成細(xì)胞的分化,其A和B亞基的表達(dá)得以增強(qiáng)。B和γ-ENaC亞基對于浮腫液發(fā)揮其作用,對遠(yuǎn)端肺上皮的凈液吸收發(fā)揮作用。并且已經(jīng)得出結(jié)論,這些亞基在高眼壓小鼠的視網(wǎng)膜中差異表達(dá),因此,A-ENaC蛋白的上調(diào)可以作為針對眼內(nèi)壓升高的保護(hù)機(jī)制。

應(yīng)用[4][5]

用于腺嘌呤致大鼠慢性腎功能衰竭時腎臟上皮鈉通道和鈉鉀氯共轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)研究

腎臟維持機(jī)體水鹽代謝、酸堿平衡以及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)主要是通過上皮鈉通道(ENaC)、鈉鉀氯共轉(zhuǎn)運(yùn)體(NKCC2)和水通道蛋白(AQP2)對水鹽代謝的調(diào)控來實(shí)現(xiàn)的。

為研究慢性腎功能衰竭過程中這些蛋白的變化,本實(shí)驗(yàn)通過建立腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭大鼠模型,應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、血尿生化檢測、免疫組織化學(xué)染色、RT-PCR和Werstern blotting等方法,觀察腎臟形態(tài)學(xué)及各生化指標(biāo)的變化,腎臟主要的鈉通道NKCC2、γ-ENaC以及水通道AQP2 mRNA及蛋白水平的變化,以及NKCC2、γ-ENaC在細(xì)胞定位的改變,研究NKCC2和γ-ENaC在慢性腎功能衰竭中所起的作用和其調(diào)節(jié)機(jī)制。研究結(jié)果顯示,慢性腎功能衰竭時出現(xiàn)多尿,以及電解質(zhì)紊亂,腎小管上皮細(xì)胞NKCC2、AQP2 mRNA及蛋白水平降低,而γ-ENaCmRNA表達(dá)增多,蛋白水平卻表現(xiàn)出下降趨勢,并與功能學(xué)指標(biāo)相關(guān)。

研究結(jié)果提示:慢性腎功能衰竭是由代償向失代償過度的漸進(jìn)過程,腺嘌呤所致大鼠腎衰腎小管重吸收障礙先于腎小球?yàn)V過障礙。大鼠慢性腎功能衰竭時,NKCC2、γ-ENaC蛋白水平降低是導(dǎo)致尿量增多及血鈉降低的主要原因之一。

參考文獻(xiàn)

[1]Effects of inhibition of the Na+-K+-2C1 cotransporter on myogenic and angiotensin II responses of the rat afferent arteriole.Wang X,Breaks J,Loutzenhiser K,Loutzenhiser R.American Journal of Physiology Renal Physiology.2007

[2]Vasopressin increases Na-K-2C1 cotransporter expression in thick ascending limb of Henle’s loop.Kim GH,Ecelbarger CA,Mitchell C,Packer RK,Wade JB,Knepper MA.American Journal of Physiology.1999

[3]Mechanism of vasopressin action in the renal collecting duct.Knepper MA,Nielsen S,Chou CL,et al.Seminars in Nephrology.1994

[4]NHE3:A Na+/H+exchanger isoform of renal brush border.Biemesderfer D,Pizzonia J,Abu-Alfa A,Exner M,Reilly R,Igarashi P,Aronson PS.American Journal of Physiology.1993

[5]程潤芬.腺嘌呤致大鼠慢性腎功能衰竭時腎臟上皮鈉通道和鈉鉀氯共轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)[D].吉林大學(xué),2009.

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