背景[1-3]
組氨酸標簽蛋白染色試劑盒是重要的分子生物學技術(shù)，廣泛用于載體構(gòu)建、基因改造、蛋白質(zhì)功能研究等領(lǐng)域。但傳統(tǒng)的方法需要使用單鏈DNA模板，而得到單鏈DNA模板又需要先將基因克隆到類似M13這種載體中，操作過程冗長。
組氨酸標簽蛋白染色試劑盒能夠通過熒光染色來特異地檢測聚丙烯酰胺凝膠中（例如，SDS-PAGE）含組氨酸標簽的蛋白。使用該種染色試劑可以直接在膠上檢測His標簽融合蛋白的表達，而無需進行轉(zhuǎn)膜和蛋白免疫印跡。雖然最低檢出限依賴于所使用的紫外燈（300納米）及檢測儀器（是CCD照相機），但是該試劑盒是在過程之中評估組氨酸標簽蛋白表達量的一種方便的方法，并且該試劑盒與后續(xù)的考馬斯染料及其它總蛋白染色方法兼容。
組氨酸標簽蛋白染色試劑盒特點：
1.比蛋白免疫印跡法快兩到三倍，可以更快地得到結(jié)果并且節(jié)省珍貴的研究時間。
2.可直接在膠上檢測，無需進行轉(zhuǎn)膜和蛋白質(zhì)免疫印跡卻可以檢測僅有0.2微克的6x組氨酸標簽蛋白。
3.即用，含兩種試劑配方–無需混合、無需稀釋；確保了一種簡單易行、操作無錯誤的檢測方法。
4.用于單獨、特異地檢測6x組氨酸標簽蛋白的熒光檢測方法–檢測您希望檢測的目的蛋白(CCD照相方法可以檢測到低豐度蛋白，UV透射方法可以檢測大
量的標簽蛋白)。
5.與各種藍色染色試劑兼容，可以特異染色6x組氨酸標簽蛋白并且可在此后利用藍色染色試劑進行總蛋白染色。
應用[4][5]
用于亞氨基二乙酸修飾的共軛聚合物熒光標記組氨酸標簽蛋白研究
設(shè)計并合成了以聚撐苯乙炔為主鏈,在側(cè)鏈中引入IDA的負電荷共軛聚電解質(zhì)PPEIDA,并對其進行了如下具體研究:（1）對其與金屬離子相互作用進行了分析,在甲醇溶液中金屬離子對PPEIDA的淬滅效率要遠高于在水溶液中,這是一個反常而有趣的現(xiàn)象,也正因為在水溶液在鎳離子對PPEIDA的淬滅效率并不高,我們可以進一步利用依然保持較強熒光的PPEIDA與鎳離子的絡(luò)合物進行接下來的實驗。
（2）利用FA和FRET驗證了PPEIDA-Ni2+-His-Protein體系的可行性。FA實驗中,PPEIDA溶液只有在有鎳離子存在時加入帶有組氨酸標簽的蛋白才會有熒光各向異性的升高,鎳離子或者組氨酸標簽的缺席都不能使各向異性有所改變;FRET實驗中,也只有在鎳離子和組氨酸標簽同時存在時,PPEIDA才能向組氨酸標簽紅色熒光蛋白進行熒光共振能量轉(zhuǎn)移。FA和FRET實驗均說明了鎳離子以及組氨酸標簽對于此體系生效的不可或缺性。
（3）實際應用PPEIDA-Ni2+-His-Protein體系。在Western Blot實驗中利用PPEIDA與鎳離子絡(luò)合物替代一抗和二抗對組氨酸標簽蛋白進行成像,省去了眾多繁復的步驟,且不再依賴于專門的顯影設(shè)備,大大節(jié)省了Western Blot實驗的時間和成本。進一步的,我們還將此體系運用至細胞成像,成功地用PPEIDA與的鎳離子絡(luò)合物熒光成像Hela細胞表面的組氨酸標簽蛋白。
參考文獻
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[2]A Molecular Brush Approach to Enhance Quantum Yield and Suppress Nonspecific Interactions of Conjugated Polyelectrolyte for Targeted Far‐Red/Near‐Infrared Fluorescence Cell Imaging[J].Kan‐YiPu,KaiLi,BinLiu.Adv.Funct.Mater..2010(17)
[3]Conjugated polyelectrolytes as fluorescent sensors[J].Yan Liu,Katsu Ogawa,Kirk S.Schanze.Journal of Photochemistry&Photobiology,C:Photochemistry Reviews.2009(4)
[4]Oligohis‐tags:mechanisms of binding to Ni2+‐NTA surfaces[J].StevenKnecht,DanielRicklin,Alex N.Eberle,BeatErnst.J.Mol.Recognit..2009(4)
[5]蔡愷.亞氨基二乙酸修飾的共軛聚合物熒光標記組氨酸標簽蛋白[D].清華大學,2017.