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DNA聚合酶的應(yīng)用

2021/1/21 13:32:23

DNA聚合酶是細(xì)胞復(fù)制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶,以DNA為復(fù)制模板,將DNA由 5’端點(diǎn)開(kāi)始復(fù)制到3’端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具備模板、引物、 dNTP等的情況下)及其相輔的活性。

應(yīng)用

耐熱DNA聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5’-3’聚合酶活 性,但不一定具有3’-5’和5’-3’的外切酶活性。3’-5’外切酶活性可以消除錯(cuò)配,切平末端; 5 ’ -3 ’外切酶活性可以消除合成障礙。

超嗜熱古菌Palaeo coccus pacificus DY20341分離自東太平洋洋中脊熱液區(qū), 其基因組測(cè)序已經(jīng)完成。預(yù)測(cè)一共有2001個(gè)開(kāi)放閱讀框,其中78.11%沒(méi)有確定的生物學(xué)功 能。

盡管商業(yè)化的DNA聚合酶多種多樣,針對(duì)不同擴(kuò)增目的片段所需的特異DNA聚合酶體系仍然是必要的。

本發(fā)明的目的是提供一種DNA聚合酶。

本發(fā)明所提供的DNA聚合酶,其氨基酸序列如序列表中序列4所示。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種編碼DNA聚合酶的基因。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種重組表達(dá)載體,其多克隆位點(diǎn)上插入有所述的編 碼DNA聚合酶的基因。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種重組菌,其含有所述的重組表達(dá)載體。

其中,所述重組菌為大腸桿菌。

所述的DNA聚合酶可在PCR中應(yīng)用。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種獲得目的基因的方法,所述方法包括如下步驟:

根據(jù)目的基因的序列設(shè)計(jì)引物,

以含有目的基因的DNA片段或基因組DNA為模板,利用所設(shè)計(jì)的引物和所述的DNA 聚合酶進(jìn)行PCR,

分離PCR產(chǎn)物獲得目的基因。

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