背景^[1-3]

胸腺素Β10抗體是可以特異性結(jié)合胸腺素Β10的一類多克隆抗體，主要用于檢測胸腺素Β10的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。

檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中胸腺素Β10水平。用純化的胸腺素Β10抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胸腺素Β10，再與HRP標記的胸腺素Β10抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胸腺素Β10呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中胸腺素Β10濃度。

胸腺素β10（Tβ10）是胸腺素β家族成員。與Tβ4一樣,Tβ10也是與細胞運動有關(guān)的肌動蛋白隱蔽蛋白。研究發(fā)現(xiàn)Tβ10可能與某些腫瘤行為,如細胞增殖、細胞凋亡、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等相關(guān)。

目前細胞中Tβ10作用的分子機制尚不明確。有研究表明,Tβ10有差別地表達于胚胎發(fā)生和神經(jīng)發(fā)育過程中,在炎癥及腫瘤發(fā)生時其表達量也有所上調(diào),甚至過表達。研究表明Tβ10表達改變與乳腺癌、食管癌、肝癌、膽管癌、卵巢癌等惡性腫瘤關(guān)系密切。根據(jù)癌癥類型的不同，Tβ10呈現(xiàn)出不同的表達狀態(tài)，而且具體作用機制尚未明確。

應(yīng)用^[4][5]

用于GRα調(diào)控Tβ10致豬骨骼肌細胞氧化應(yīng)激的研究

應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致機體內(nèi)應(yīng)激激素大量分泌,其中以皮質(zhì)醇為主,它是影響肉質(zhì)的一個較為重要的因素。課題組前期研究表明,在動物日糧飼喂過程中添加皮質(zhì)醇會導(dǎo)致仔豬背最長肌肌肉組織受損嚴重,肌纖維間隙增大,凋亡細胞數(shù)增多。

但目前關(guān)于應(yīng)激激素是如何影響肉質(zhì)以及通過何種方式導(dǎo)致肉質(zhì)發(fā)生變化的機制并不完全清楚。現(xiàn)今研究表明糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)主要通過細胞膜與體內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)結(jié)合發(fā)揮一系列調(diào)控作用。

GRα靶基因的篩選干擾GRα后根據(jù)表達差異篩選GRα的靶基因,定量結(jié)果顯示,干擾GRα后極顯著下調(diào)Tβ10的表達,下調(diào)HSP90和HSP27的表達;且超表達GRα后Tβ10的表達顯著升高,上調(diào)HSP90和HSP27的表達,且在網(wǎng)站上預(yù)測出GRα與Tβ10的結(jié)合位點。

因此推測Tβ10可能是GRα的靶基因,雙熒光素酶報告和染色質(zhì)免疫共沉淀等試驗初步驗證,結(jié)果表明Tβ10可能是GRα潛在的靶基因。構(gòu)建Tβ10超表達載體后通過流式細胞儀檢測Tβ10對PSC細胞凋亡的影響,結(jié)果表明:超表達Tβ10可以促進PSC細胞凋亡。

且通過檢測細胞的氧自由基發(fā)現(xiàn)其含量顯著升高,說明細胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。通過qPCR實驗檢測Tβ10對細胞應(yīng)激與凋亡調(diào)控相關(guān)基因的影響,結(jié)果表明:超表達Tβ10能促進PSC細胞中BAX、HSP90、HSP27和CAST的表達。

參考文獻

[1]Effects of extraction methods on the yield,chemical structure and anti-tumor activity of polysaccharides from Cordyceps gunnii mycelia[J].Zhen-yuan Zhu,Fengying Dong,Xiaocui Liu,Qian Lv,YingYang,Fei Liu,Ling Chen,Tiantian Wang,Zheng Wang,Yongmin Zhang.Carbohydrate Polymers.2016

[2]Astragalus Polysaccharide Suppresses 6-Hydroxydopamine-Induced Neurotoxicity in Caenorhabditis elegans[J].Haifeng Li,Ruona Shi,Fei Ding,Hongyu Wang,Wenjing Han,Fangli Ma,Minghua Hu,Chung Wah Ma,Zebo Huang,Renata Szymanska.Oxidative Medicine and Cellular Longevity.2016

[3]Corticosteroids[J].Sivapriya Ramamoorthy,John A.Cidlowski.Rheumatic Disease Clinics of North America.2016(1)

[4]Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects via MyD88-dependent signaling pathway[J].Zifang Feng,Zhixue Wang,Min Yang,Lijing Zhou,Yixi Bao.International Journal of Biological Macromolecule.2015

[5]牛紅丹.GRα調(diào)控Tβ10致豬骨骼肌細胞氧化應(yīng)激的研究[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2018.