簡介[1]
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一藥物或者物質(抑制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質,比如酶,細胞受體或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解為一定濃度的某種藥物誘導腫瘤細胞凋亡50%,該濃度稱為50%抑制濃度,即凋亡細胞與全部細胞數(shù)之比等于50%時所對應的濃度,IC50值可以用來衡量藥物誘導凋亡的能力,即誘導能力越強,該數(shù)值越低,當然也可以反向說明某種細胞對藥物的耐受程度。
利用噻唑蘭(MTT),透過細胞膜進入細胞內,活細胞線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT還原為難溶于水的藍紫色的甲臜(Formazan)結晶并沉積在細胞中,結晶物能被二甲基亞砜(DMSO)溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映細胞數(shù)量。
檢測步驟[1]
1、細胞接種:收到客戶細胞后,我們會用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞,得出細胞懸液濃度。計算出應稀釋倍數(shù),按MTT試劑盒要求在96孔板內接種相應濃度的細胞懸液;
2、細胞培養(yǎng):然后在無菌恒溫細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)接種好的96孔細胞培養(yǎng)板,并實時觀察細胞狀態(tài);
3、藥物處理并呈色:按不同濃度梯度加入藥物作用細胞;
4、溶解,比色:加入MTT檢測試劑,按操作要求孵育相應時間,在酶標儀內檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出IC50結果。
主要參考文獻
[1] 趙斌 葛金芳 黃曉暉 李?。恍∽h在MTT法測細胞增殖抑制率中IC50的計算方法。第十一屆全國數(shù)學藥理學學術會議