原理^[1]

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA, RNA等等入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。因為不同的細(xì)胞在生理代謝及分裂上均存在差異,因此研究者將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的過程中需要選擇不同的方式。

方法^[1]

目前，將外源物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的方法主要分為三大類: 1、脂質(zhì)體(或是脂質(zhì)體替代物)轉(zhuǎn)染; 2、電轉(zhuǎn); 3、病毒感染。這三種方法互有優(yōu)劣。脂質(zhì)體或是脂質(zhì)體替代物轉(zhuǎn)染操作簡便,價格低廉，但是對細(xì)胞毒性大。而且，有些細(xì)胞通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低;電轉(zhuǎn)操作方便快捷,但是需要專門]的儀器,對細(xì)胞損傷也比較大；病毒感染克服了前兩者的劣勢,感染效率高,對細(xì)胞毒性小，但是病毒前期包裝需要大量的時間和精力。

操作流程^[1]

1、轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

a.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

b.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2、選擇合適的混合比例(1: 1 - 1: 2/脂質(zhì)體體積: DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 胡英，金一；陽離子膜融合脂質(zhì)體的細(xì)胞轉(zhuǎn)染機(jī)制及其保護(hù)作用?！吨袊帉W(xué)雜志》