9004-10-8
中文名稱
胰島素
英文名稱
INSULIN
CAS
9004-10-8
分子式
C256H381N65O76S6
分子量
5777.59
MOL 文件
9004-10-8.mol
更新日期
2024/12/31 11:20:41
9004-10-8 結(jié)構(gòu)式
基本信息
中文別名
胰島素因蘇林
胰激素
胰島素 溶液 來源于牛胰腺
英文別名
C00723LinBit
iletin
INSULIN
Humilin
Musulin
insular
insulyl
iszilin
decurvon
所屬類別
生物化學(xué)品: 多肽及蛋白質(zhì)類: 蛋白質(zhì)類物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀本品為白色或類白色結(jié)晶粉末，是從豬或牛胰中提取制得的。據(jù)精制方法不同，有兩種形態(tài)：不規(guī)則細粉顆粒(無定形)和扁斜形六面體?？扇苡谙〈?、稀丙酮、酸、堿中，不溶于90%以上乙醇及其他有機溶劑，在pH 2-4時更穩(wěn)定，在堿性介質(zhì)中易破壞，加熱易變性。遇蛋白酶、強酸、強堿均能破壞。等電點pH 5.3-5.4，易與鋅、鎘、鈷等2價金屬結(jié)合。藥用常制成鋅胰島素，與魚精蛋白能形成復(fù)合體，且作用時間較長。
熔點233 °C
密度1.09 g/cm3
儲存條件2-8°C
溶解度acidified water, pH 2.0: 2 mg/mL
形態(tài)solution
安全數(shù)據(jù)
警示詞危險
危險性描述H334
安全說明22-24/25
WGK Germany3
RTECS號NM8900250
F3-10
毒害物質(zhì)數(shù)據(jù)9004-10-8(Hazardous Substances Data)
制備方法
方法1
胰島素可以從豬、牛、羊等食用動物胰臟中提取?，F(xiàn)已成功地應(yīng)用遺傳工程方法將人胰島素基因克隆植于大腸桿菌的脫氧核糖核酸中，從而開發(fā)了利用細菌生產(chǎn)人胰島的新技術(shù)，并已進入放大試生產(chǎn)階段。這種重組產(chǎn)品人胰島素由于不受天然資源限制，成本低，最終將取代現(xiàn)有的豬、牛胰島素。從鍺胰提取胰島素的工藝過程：1.剝離、提取、過濾2.氨化、壓濾、酸化、濃縮3.脫脂、鹽析4.精制5.結(jié)晶、干燥方法2
方法一、酸醇提取減壓濃縮法提取、堿化、酸化 將凍胰刨碎，加入2.3-2.6倍量86%-88%乙醇和5%草酸，10-15℃攪拌提取3h，離心，濾渣再用1倍量68%-70%乙醇和0.4%草酸提取2h，分離后合并濾液。提取液在10-15℃攪拌，并用氨水調(diào)pH為8-8.4，壓濾除去蛋白質(zhì)，及時酸化pH3.6-3.8，降溫為5℃，靜置4h使酸性蛋白沉淀。
豬胰臟[乙醇(70%), 草酸]→[10-15℃]提取液[氨水]→[pH8-8.4]堿化液[硫酸，pH3.6-3.8]→[5℃]酸化液
濃縮、去脂、鹽析 將上清液置減壓濃縮鍋，下層用帆布過濾，棄沉淀，將上清液并入濾液，減壓回收乙醇，將余液濃縮至相對密度為1.04-1.06。濃縮液轉(zhuǎn)入去脂鍋，速熱至50℃，速降至5℃，靜置4h，分離下層清液，調(diào)pH2-2.5，20℃攪拌加入270g/L固體氯化鈉，保溫靜置，得鹽析物胰島素粗品。
酸化液[30℃以下]→濃縮液[速熱速冷]→去脂液[NaCl, pH2]→鹽析物
除酸性蛋白、鋅沉淀 鹽析物按干重計算，用7倍量蒸餾水溶解，再加3倍量冷丙酮，4mol/L氨水調(diào)pH4.2-4.3，補加丙酮，使液中水和丙酮的比例為7:3，充分攪拌，5℃以下放置過夜。次日低溫分離，得除酸性蛋白的濾液。濾液中加入氨水(4mol/L)，調(diào)pH 6.2-6.4，加人體積分數(shù)為3.6%的乙酸鋅(20%)溶液，再用上述氨水調(diào)pH 6，低溫過夜。過濾，收集沉淀，用冷丙酮洗滌。
鹽析物[水，丙酮，氨水]→[pH4.2-4.3]濾液[氨水，醋酸鋅]→[pH6]沉淀
除堿性蛋白、結(jié)晶 沉淀按每克加冷2%枸櫞酸50ml、65g/L乙酸鋅溶液2ml、丙酮16ml，用冰水稀至100ml，溶解冷至5℃以下，用氨水(濃度同前)調(diào)pH8，速過濾，濾液速用枸櫞酸(10%)液調(diào)pH6，補加丙酮，使丙酮含量達16%。慢速攪拌3-5h，結(jié)晶析出后，于5℃放置3-4天。離心，取沉淀，去除上層灰黃沉淀，用水洗，丙酮、乙醚脫水，離心將結(jié)晶干燥，得結(jié)晶胰島素。pH 4.2沉淀回收制劑。
沉淀[枸櫞酸，乙酸鋅，丙酮，氨水]→[pH8, 5℃以下，過濾]濾液[枸櫞酸，丙酮]→[pH6]結(jié)晶[干燥]→結(jié)晶胰島素
沉淀回收 取除酸性蛋白(pH 4.2-4.3)的沉淀，用冷蒸餾水(7倍量)攪勻，鹽酸(2mol/L)調(diào)pH2.5，加干品量的3倍丙酮，用氨水(2mol/L)調(diào)pH4.2-4.3，補丙酮至30%，冷藏過夜。5℃以下，過濾，用氨水(2mol/L)調(diào)pH 6.2，每100ml加乙酸鋅(20%)1.8 m1，用氨水(2mol/L)調(diào)pH 6，低溫過夜。過濾，沉淀按(4)結(jié)晶處理。
方法二、分級提取直接鋅鹽沉淀
提取 將凍胰用刨胰機刨碎，按100kg胰加入300L 82%乙醇的比例投料。在10-12℃下加入6mol/L硫酸調(diào)pH 2.8-3，攪拌提取0.5h，再加6mol/L鹽酸調(diào)pH 2，繼續(xù)攪拌2.5h。分離殘渣，再加人65%乙醇150 L，用上述鹽酸調(diào)pH 2，攪拌提取2h，分離，合并兩次提取液。
豬胰臟[乙醇，硫酸，HCl]→[pH2.8-3, 10-12℃]提取液
堿化、酸化 提取液冷至0-5℃，用濃氨水調(diào)pH 7.8，加硅藻土板框壓濾，即用V鹽酸：V硫酸：V水=4：1：4液酸化pH2.5，沉淀完全后虹吸清液，吊濾，清液加氯化鋅液(每100kg胰加3kg，pH2.5)，取清液吊濾，清液用濃氨水調(diào)pH 6.8，于5℃過夜。次日，虹吸除去清液，過濾收集沉淀(上述過程均在0-5℃)。
提取液[氨水，水，混合酸]→[pH7.8-8, pH2.5]濾液[氯化鋅，氨水]→[pH2.5-6.8]沉淀
鋅沉淀、脫脂、鹽析、分級沉淀 取沉淀溶于5倍量蒸餾水，用6mol/L鹽酸調(diào)pH 2.7，12-15℃放置。次日放出下層清脫脂液，上層脂肪再用5倍量蒸餾水洗滌，回收下層清液做下批鋅沉淀溶解用。脫脂液用6mol/L鹽酸調(diào)pH 2.5，25℃加入270g/L氯化鈉鹽析，得粗制品，溶于20倍量蒸餾水中，再用上述鹽酸調(diào)pH 2.5，加160g/L氯化鈉鹽析，過濾，收集鹽析物，將其溶于7倍量蒸餾水中，加3倍量丙酮，用4mol/L氨水調(diào)pH 4.5，冷至0-5℃過夜，除沉淀 (另回收)得清液。
沉淀[HCl, 12-15℃]→[pH2.7]脫脂液[HCl, NaCl]→[pH2.5]粗制品[HCl, NaCl]→[pH2.5]鹽析物[氨水，丙酮，水]→[pH4.5]清液
鋅沉淀、結(jié)晶、干燥 取清液用4mol/L氨水調(diào)pH 6，加20%醋酸鋅液 (按100 kg胰加30m1)，析出白色沉淀，過濾，收集沉淀。按下列配方結(jié)晶(以 100kg胰所得沉淀物計算)：2%枸櫞酸500 ml，20%醋酸鋅6.5ml，丙酮160 ml，蒸餾水稀釋至1000 ml。冷卻至0-5℃，用4mol/L氨水調(diào)pH 8，過濾，除去沉淀。用10%枸櫞酸調(diào)pH 6，攪拌結(jié)晶2天，虹吸除去清液，離心收集結(jié)晶，用蒸餾水、丙酮各洗2次，置于五氧化二磷真空干燥器中干燥，即得胰島素成品。
清液[醋酸鋅，氨水]→[pH6]沉淀[枸櫞酸，丙酮，醋酸鋅]→[0-5℃，pH6]結(jié)晶體[水，丙酮]→[P2O5]胰島素成品。
應(yīng)用領(lǐng)域
參考質(zhì)量標準
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原料藥
中國藥典2000年版732頁
指標名稱
指標
指標名稱
指標
效價/為標示量的91%-110%/干燥失重/%
≤10.0
吸光度A(276nm)
0.48-0.55
鋅
(mg
1000U)
≤0.4
氮/%
14.5-16.0
注射劑
中國藥典2000年版732頁
指標名稱
指標
指標名稱
指標
效價/91%-116%
鋅/(mg/1000U)/≤0.4
pH值
6.6-8.0
細菌內(nèi)毒素(EU
單位胰島素)
<0.8
常見問題列表
簡介
胰島素為白色或類白色結(jié)晶粉末，是從豬或牛胰中提取制得的。據(jù)精制方法不同，有兩種形態(tài)：不規(guī)則細粉顆粒(無定形)和扁斜形六面體?？扇苡谙〈肌⑾”?、酸、堿中，不溶于90%以上乙醇及其他有機溶劑，在pH 2-4時更穩(wěn)定，在堿性介質(zhì)中易破壞，加熱易變性。遇蛋白酶、強酸、強堿均能破壞。等電點pH 5.3-5.4，易與鋅、鎘、鈷等2價金屬結(jié)合。藥用常制成鋅胰島素，與魚精蛋白能形成復(fù)合體，且作用時間較長。
