熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎(chǔ)也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 | 紅色毛癬菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Trichophyton rubrum |
貨號 | XGR97333 |
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
5E Others Human 人 5E / CD73 人細胞裂解液 (陽性對照) 生長激素釋放因子-2GHRP-2質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
小鼠結(jié)締組織L細胞株929克隆;L-929 [L929]胰高血糖素樣肽-2(1-34),人GLP-2 (1-34) (human)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
人少突膠質(zhì)前體細胞(HOPC)(貼壁生長)胰高血糖素(1-29),牛,人,豬Glucagon (1 - 29), bovine,human, porcine質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
原代滑膜皮細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml胰高血糖素(19-29),牛,人,豬Glucagon (19 - 29), bovine,human, porcine質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
人子宮內(nèi)膜腺癌細胞;HEC-1-B 大鼠子宮頸上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL胰高血糖素樣肽Ⅰ(7-36)酰胺,人Glucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
ACVR2A Others Mouse 小鼠 ACVR2A / AcIIa 人細胞裂解液 (陽性對照) TAK875TAK-875質(zhì)量規(guī)格:>98%,GPR40激動劑
氣管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)GDPNa2;5’-二1酸鳥苷二鈉GDP Di Salt質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
MAP4K5 Others Human 人 MAP4K5 / MEKKK5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) SU11274SU-11274質(zhì)量規(guī)格:>98%,選擇性的Met抑制劑
小鼠畸胎瘤細胞;F9尿苷;尿嘧啶核苷Uridine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
L6細胞,大鼠成肌細胞 人低轉(zhuǎn)移肝癌細胞,MHCC97-L細胞 CL-0120HuH-7(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×2尿嘧啶核苷,尿苷(標準品)Uridine質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12]諾氟沙星煙酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進口Norfloxacin nicotinate
CD274 Others Human 人 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人細胞裂解液 (陽性對照) 西咪替丁-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進口Cimetidine-d3
原代成纖維細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100mlN-去甲基氯氮平-d8質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Desmethyl Clozapine-d8
PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基-d3佐米曲坦質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Desmethyl-d3 Zolmitriptan
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0902檸檬酸三甲酯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Trimethyl
人間充質(zhì)干細胞-肝臟總RNAHMSC-hp NAGLUTATHIONE,OXIDIZED谷胱甘肽(氧化型)高級白色凍干粉COLDsigma
B3G2 Others Human 人 B3G2 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸丫黃素 Acriflavine hydrochloride 8063-24-9 5G 通用試劑
紅色毛癬菌探針法熒光定量PCR試劑盒人髂動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL二十一烷 Hqnqicoscnq 69-94-7
L929細胞,小鼠成纖維細胞 3T3-L1(小鼠脂肪細胞) 小鼠腦瘤細胞;BC3H1CESIUMCHLORIDE錄化銫生物技術(shù)級白色結(jié)晶RTsigma
CSF1 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標簽)1666-13-3二本二硒Dipxenyl diselenide
熒光化學(xué)物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
關(guān)鍵字: 紅色毛癬菌探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Trichophyton rubrum;XGR97333;
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