PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:庫(kù)蚊通用PCR試劑盒
英文名稱:Culex spp.PCR
編號(hào): FSP1540
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
FKSG14/Centromere protein K著絲粒蛋白K特價(jià)促銷anti- DIRAS2 antibody石蠟切片組織蛋白(化學(xué)處理II)萃取試劑盒膜突蛋白抗體
FNDC1Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1特價(jià)促銷anti- DIS3 antibody膜蛋白溶解緩沖液原癌基因M-ras抗體
MX2/MXB干擾素誘導(dǎo)GTP結(jié)合蛋白MX2抗體特價(jià)促銷anti- DIS3L antibodyBradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體
APLP2淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體特價(jià)促銷anti- DIS3L2 antibodyBradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體
ZNF804A鋅指蛋白804A抗體特價(jià)促銷anti- DISC1-long-specific antibody蛋白定量樣品預(yù)處理試劑蜜蜂微孢子蟲(chóng)蛋白抗體
SENP5泛素相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白酶5抗體特價(jià)促銷anti- DISP1 antibodyBCA蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒突變型P53抗體
APLP1淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體特價(jià)促銷anti- DIXDC1 antibodyLOWRY蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒絲裂原活化蛋白激酶4抗體
FbxL12FBXL12蛋白抗體特價(jià)促銷anti- DKC1 antibodyNINHYDRIN蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體
庫(kù)蚊通用PCR試劑盒Human PHACTR4 ELISA KitFAM89B/MMTV-R 乳腺腫瘤病毒受體同源蛋白抗體鎢粉熊果酸進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)PASK/STK39 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶39抗體含量:HPLC≥98%
Human PHAX ELISA KitIL-11RA 白介素11受體α/IL-11Rα抗體硫代乙酰胺熊果苷進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)HES1 轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體含量:HPLC≥98%
Human PHC2 ELISA KitKCNQ-1 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體硫代乙酰胺辛弗林進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Factor VIII 第八因子抗體含量:HPLC≥98%
Human PHD2(Prolyl hydroxylase domain-containing protein 2) ELISA KitIL-10 白細(xì)胞介素-10抗體Terbium oxide進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Noggin 指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體含量:HPLC≥98%
Human MUSK(Muscle, skeletal receptor tyrosine-protein kinase) ELISA KitLIPG/Endothelial lipase 內(nèi)皮脂肪酶抗體Terbium oxide對(duì)香豆酸進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)GGT1/CD224 γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶抗體含量:HPLC≥98%
Human PHD1 ELISA KitMSR1/CD204 巨噬細(xì)胞清道夫受體1/2/3抗體Terbium oxide延胡索進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)TAGL2/TAGLN2 細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白2抗體含量:滴定法≥98%
Human PEX5 ELISA KitNPC1/Niemann Pick C1 尼曼匹克C1前體蛋白抗體Terbium oxide羊藿苷進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Peroxiredoxin 2/PRXII 還蛋白過(guò)化物酶Ⅱ/巰抗化蛋白抗體含量:HPLC≥98%
Human PFDN1 ELISA KitPerilipin A+B 脂滴包被蛋白A+B抗體2,4,5-三氨基-6-羥基嘧啶硫酸鹽水合物柚皮苷進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)IL-8/CXCL8 白介8抗體含量:HPLC≥98%
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 庫(kù)蚊通用;PCR試劑盒;50T;FSP1540;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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