別名: AKT;CWS6;PKB:PKB-ALPHA:PRKBARACRAC-ALPHA
應(yīng)用: WB IHCIF
稀釋比例: WB 1500-2000. IHC 1:50-100. IF 1:50-100.
蛋白分子量: 56kDa
Gene ID: 207
保存: Store at -20°C. Avoid freeze 1 thaw cycles.
儲存液: Bufr. PBS with 0.02% sodium azide, 50% glycerol, pH73.
純化方法Afnity purification
亞型: IgG
免疫原: A synthetic peptide of human AKT1
性狀:液體
Public Immunogen Range: A syntthetic peptide of human AKT1
Subellular Locations: Cell membrane Cytoplasm Nucleus
Swiss Prot: P31749
克隆類型: Polyclonal Antibody
注意事項:
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。
2、雖然作用溫和，但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù)，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意 有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴-次性手套操作
操作步驟:
根據(jù)使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗-遍。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接蟲。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品:把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品1000-14000g 離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
溫馨提示:
工作液與濃縮液選擇的技巧，以及各自的優(yōu)勢。
1,工作液的優(yōu)勢:工作液操作方便，降低實驗操作步驟，對于要求無菌的實驗，降低染菌風(fēng)
金。
2,濃縮液的優(yōu)勢:濃縮液成本相對較低，實驗范圍更廣，對于不要求無菌的實驗，可以進行多種濃度的實驗分析以及比較。而且由于濃度高,保存更加穩(wěn)定。