"KBM-5細(xì)胞：人慢性髓白血病細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：慢性髓白血??；女性
細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣
細(xì)胞生長(zhǎng)：懸浮
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸浮
培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-１９６℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。【凍存細(xì)胞】１)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外；４)分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記；６)凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩?fù)蘇細(xì)胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時(shí)搖動(dòng)，使其急速融化，３０～６０s內(nèi)完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。凍存細(xì)胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達(dá)到１０／ml，在融后稀釋２０倍時(shí)，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。
貼壁細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：細(xì)胞凍存液需提前配制，不可直接將DMSO加入細(xì)胞懸液中；不同細(xì)胞消化時(shí)間有差異，以實(shí)際鏡檢結(jié)果為準(zhǔn)，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)；應(yīng)選擇匯合度80%-90%左右，細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行凍存操作，確保細(xì)胞凍存時(shí)狀態(tài)，凍存密度可根據(jù)細(xì)胞特性進(jìn)行調(diào)整；凍存細(xì)胞保存溫度應(yīng)低于-130℃，不可在-80℃長(zhǎng)期保存。貼壁細(xì)胞凍存操作步驟：從培養(yǎng)箱中取出準(zhǔn)備凍存的細(xì)胞；顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)并拍照記錄；酒精消毒培養(yǎng)瓶后放入安全柜中；吸去多余的培養(yǎng)基，加人2~3ml(PBS緩沖液)潤(rùn)洗一次；加入1ml胰酶，放入37℃消化；消化1min左右，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況；消化完全后，加3ml完全培養(yǎng)基終止；將細(xì)胞懸液移入15ml離心管中離心，1000rpm/min（約200g）離心3-5min；吸去多余的液體，向細(xì)胞沉淀中加入適量的凍存液，輕輕吸打混勻；按比例分裝至凍存管中；貼好標(biāo)簽后放入梯度凍存盒中；將凍存盒放入-80℃，降溫過夜后，移入液氮中保存。貼壁細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備事項(xiàng)：將15mL離心管、凍存管、PBS緩沖液、移液管、電動(dòng)移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌；細(xì)胞完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、細(xì)胞凍存液等從4℃冰箱中取出后，復(fù)溫至室溫，備用；程序降溫盒復(fù)溫至室溫備用。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題總結(jié)：支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀分辨之；支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義；偵測(cè)出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，該如何處理？直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株；CO２培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？定期(至少每?jī)芍芤淮? 以無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之；為何培養(yǎng)基保存于４°C冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值會(huì)越來(lái)越偏堿性？培養(yǎng)基保存于４°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO２會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過濾之CO２，以調(diào)整pH值；購(gòu)買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可；購(gòu)買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–８０°C太久；收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
2E8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT 8細(xì)胞、U-87細(xì)胞、SKUT1細(xì)胞
SP2/0 Ag-14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Cloudman S91 melanoma細(xì)胞、KTA7細(xì)胞、Psi-2-DAP細(xì)胞
Hs895T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞、SK-N-AS細(xì)胞、MOLP2細(xì)胞
MCA-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MILE SVEN 1細(xì)胞、MOLT 3細(xì)胞、OCI Ly10細(xì)胞
266 Bl細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03671C細(xì)胞、KM-H2細(xì)胞、SACC-83細(xì)胞
MCF-7ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Walker-Ca.256細(xì)胞、KASUMI1細(xì)胞、EJ 138細(xì)胞
MGc80-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hep 3B細(xì)胞、T98-G細(xì)胞、OVCAR432細(xì)胞
Ramos 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HBE 135-E6/E7細(xì)胞、SK-N-BE-2c細(xì)胞、Sc-1細(xì)胞
MIN6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1568細(xì)胞、10RGB細(xì)胞、LS 123細(xì)胞
L428細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 2650細(xì)胞、MCF-7/AdrR細(xì)胞、H82細(xì)胞
H-1882細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IPECJ2細(xì)胞、K7M2細(xì)胞、MIA PaCa-2細(xì)胞
T173細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hep-G2/C3A細(xì)胞、GOS3細(xì)胞、SUNE-1細(xì)胞
GB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 680N細(xì)胞、HL1細(xì)胞、rUCMSCs細(xì)胞
HGC27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK BR 03細(xì)胞、MDA-134細(xì)胞、Hep G2細(xì)胞
Mv 1 Lu (NBL-7)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BCaP 37細(xì)胞、H-1944細(xì)胞、NCI-UMC-11細(xì)胞
NIE 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B16-F10-BL6細(xì)胞、Bac1 2F5細(xì)胞、NCIH1395細(xì)胞
NIE 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B16-F10-BL6細(xì)胞、Bac1 2F5細(xì)胞、NCIH1395細(xì)胞
COLO320-DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HuO9細(xì)胞、RBMEC細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞
D283MED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Lu99A細(xì)胞、HEK293S細(xì)胞、DoTc2細(xì)胞
Mouse INsulinoma 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U251MG細(xì)胞、H1436細(xì)胞、WI38細(xì)胞
OS-RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NUGC2細(xì)胞、SF-767細(xì)胞、3T6細(xì)胞
3T6-Swiss albino細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-9/S1細(xì)胞、STC-1細(xì)胞、G361細(xì)胞
SUM-102細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1651細(xì)胞、NRK 49F細(xì)胞、SKN-AS細(xì)胞
SkChA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：REC1細(xì)胞、H-146細(xì)胞、LU165細(xì)胞
SUM-159-PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Sp2/0-Ag-14細(xì)胞、SW1271細(xì)胞、OVCAR4細(xì)胞
Rat 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMrSV5細(xì)胞、NCI-H1792細(xì)胞、ACT-1細(xì)胞
MRC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNBE-1細(xì)胞、DSL6A/C1細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞
NCIH1688細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H23細(xì)胞、AGS細(xì)胞、786-0WT細(xì)胞
PL-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PA1細(xì)胞、RINm-5F細(xì)胞、B 95.8細(xì)胞
CL 1-0細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HFT-8810細(xì)胞、U373-MG細(xì)胞、NCI-H292細(xì)胞
MFE280細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EBC1細(xì)胞、MG-63細(xì)胞、BaF3細(xì)胞
NCL-H548細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MOLM13細(xì)胞、HH [Human lymphoma]細(xì)胞、BEAS 2B細(xì)胞
B16/F0細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3/ag細(xì)胞、SW-839細(xì)胞、ATN1細(xì)胞
QBI-293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：G401細(xì)胞、C33-A細(xì)胞、Hs729細(xì)胞
Tb 1 Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF.10A細(xì)胞、BEL 7402細(xì)胞、NHRF細(xì)胞
NCTC-1469細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO-357細(xì)胞、Jeko1細(xì)胞、FRhK4細(xì)胞
CAL 85-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Intestinal Epithelioid細(xì)胞： No. 18細(xì)胞、HIBEpiC細(xì)胞、SCC-7細(xì)胞
H220細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-676細(xì)胞、L cells細(xì)胞、EL 4細(xì)胞
HTori-3.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BEL-7405細(xì)胞、TEC細(xì)胞、P3HR-1細(xì)胞
CWR22-Rv1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3-X63-Ag8-6-5-3細(xì)胞、Hs822T細(xì)胞、Panc203細(xì)胞
NBLS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CEF細(xì)胞、RT-BM 1細(xì)胞、RK 13細(xì)胞
C1498細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EB-3細(xì)胞、BJA-B1細(xì)胞、Mono Mac 1細(xì)胞
HCC1569細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC57細(xì)胞、UPCI-SCC-154細(xì)胞、SU86-86細(xì)胞
Calf Pulmonary Artery Endothelial細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GTL16細(xì)胞、T47-D細(xì)胞、MDA-468細(xì)胞
MHCC97細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK N SH細(xì)胞、BPH1細(xì)胞、LN299細(xì)胞
Spodoptera frugiperda clone 9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IPLB-Sf21細(xì)胞、VP 267細(xì)胞、KBM5細(xì)胞
HL-60 clone15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MLOY4細(xì)胞、Tn-5B1-4細(xì)胞、NIH-OVCAR-3細(xì)胞
H2405細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BALL-1細(xì)胞、C3H/10T1/2 CL8細(xì)胞、P3 NS1 Ag4細(xì)胞
LLC-PK-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KHYG細(xì)胞、INS-1細(xì)胞、HEK293EBNA細(xì)胞
HuTu 80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BT483細(xì)胞、MPC-83細(xì)胞、Nakata-1細(xì)胞
TR-146細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-231細(xì)胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細(xì)胞、CHO細(xì)胞
MDA436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMR106細(xì)胞、HCE-T細(xì)胞、Anip 973細(xì)胞
NCIH1648細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NRK-49F細(xì)胞、Hs343T細(xì)胞、NS-1細(xì)胞
MDAMB-231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTCTL140細(xì)胞、SUM 149PT細(xì)胞、PC3-M細(xì)胞
OCI-AML-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-294T細(xì)胞、MHCC-97細(xì)胞、UMUC3細(xì)胞
MSTO-211H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-748細(xì)胞、Bx-PC3細(xì)胞、ECGI10細(xì)胞
C2A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HaCaT細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-435細(xì)胞、Hs445細(xì)胞
SPDC-CCL141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCC-HEH-2細(xì)胞、CHP-126細(xì)胞、LTEP a2細(xì)胞
UMUC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HLE細(xì)胞、HFL-1細(xì)胞、H-2029細(xì)胞
MOPC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-294細(xì)胞、GM3570細(xì)胞、C57 Mouse Tumor 64細(xì)胞
Kit 225細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCC-IT細(xì)胞、MC3T3-L1細(xì)胞、NFHIOSE-29細(xì)胞
H-1703細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Porcine Kidney-13細(xì)胞、IOSE 80細(xì)胞、U343MG細(xì)胞
KG1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Colon-26細(xì)胞、UWB1.289+BRCA1細(xì)胞、Anip973細(xì)胞
SK-SH-SY5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QGY-7701細(xì)胞、SKO007細(xì)胞、RS4;11細(xì)胞
HR8348細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DHL10細(xì)胞、LS174T細(xì)胞、DMS153細(xì)胞
CCD-33Co細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMC細(xì)胞、SKNEP-1細(xì)胞、SBC3細(xì)胞
D-341 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR8/ADR細(xì)胞、EOC-20細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞
ssMCF7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mc Coy細(xì)胞、NCI-H2106細(xì)胞、BEL/FU細(xì)胞
SMA 560細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HPAF-II細(xì)胞、H2444細(xì)胞、I90細(xì)胞
Sol8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW2647細(xì)胞、Oregon J-111細(xì)胞、U-118MG細(xì)胞
SUM52PE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：AtT-20細(xì)胞、SNU638細(xì)胞、P3J HR1-K細(xì)胞
NCl-H157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-027細(xì)胞、OCILY-3細(xì)胞、SUIT2細(xì)胞
Hs895.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMU-S1細(xì)胞、DMS 53細(xì)胞、FDCP-1細(xì)胞
RPMI no 8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H226細(xì)胞、SW-982細(xì)胞、CMT93細(xì)胞
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關(guān)鍵字： KBM-5細(xì)胞：人慢性髓白血病細(xì)胞系;
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