"MEG-01細(xì)胞:人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:MEG-01細(xì)胞株源自一位CML患者成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa,-Schiff(PAS)反應(yīng),α醋酸酯酶和酸性酶陽(yáng)性。髓過(guò)氧化物酶,α酯酶,化醋酸AS-D酯酶和堿性酶陰性。用單克隆抗體BA-1(抗B細(xì)胞,粒性白細(xì)胞),HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細(xì)胞,血小板)染色成陽(yáng)性。其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:傳代培養(yǎng):是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉(zhuǎn)移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞,可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代,部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)步驟:①入無(wú)菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;②倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱;③超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;④打開(kāi)超凈工作臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右,關(guān)閉紫外燈,打開(kāi)風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧;⑤點(diǎn)燃酒精燈;取出無(wú)菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi);⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上;⑦倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,小培養(yǎng)瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋,適度擰緊后稍回轉(zhuǎn),以利于CO2的進(jìn)入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱;⑩對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,步驟7-9不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。 公司細(xì)胞庫(kù)凍存并保種有2300多種各類細(xì)胞系。針對(duì)每種不同的細(xì)胞系,公司摸索并積累了大量細(xì)胞培養(yǎng)條件和優(yōu)化參數(shù),為您的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究中最基礎(chǔ)、也是最常用的實(shí)驗(yàn)手段。從凍存→復(fù)蘇→傳代→實(shí)驗(yàn),在每一次細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中我們都是精心呵護(hù),小心培養(yǎng),心里都是默默承諾:我要護(hù)你一世周全!可是可是……無(wú)數(shù)次細(xì)胞都因污染而離我而去,投入的不只是我們貌美如花的青春,還有那一去不復(fù)返的經(jīng)費(fèi)!在細(xì)胞生物學(xué),生物化學(xué),免疫學(xué),神經(jīng)生物學(xué),病理學(xué)……只要涉及細(xì)胞的研究領(lǐng)域,都面臨著支原體污染的威脅。在眾多污染物中,也就屬支原體最狡猾了,他最善于隱藏自己,因?yàn)楸恢гw污染的細(xì)胞不會(huì)馬上死亡,但會(huì)改變細(xì)胞的新陳代謝,甚至?xí)淖兗?xì)胞的基因表達(dá)譜,我們就這樣被欺騙了無(wú)數(shù)次,誰(shuí)讓我們就是個(gè)看“顏值”的花癡了??墒俏覀兺ㄟ^(guò)被虐了幾百次的經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出來(lái),當(dāng)你的細(xì)胞出現(xiàn)了這些癥狀時(shí):生長(zhǎng)速率改變;活性減弱;形態(tài)改變;染色體畸變;轉(zhuǎn)染效率顯著降低;細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低……。那你就得千萬(wàn)小心了,也許你的細(xì)胞已經(jīng)被支原體欺凌了! 因?yàn)榧?xì)胞生長(zhǎng)的時(shí)候肯定是要相互聯(lián)系,大部分的細(xì)胞都是要成片生長(zhǎng)的,尤其是對(duì)于貼壁細(xì)胞,單個(gè)細(xì)胞貼壁之后長(zhǎng)著長(zhǎng)著就長(zhǎng)到一片去了。但是如果是成片的細(xì)胞抱團(tuán)的話,傳代后細(xì)胞是不能貼壁的,這樣抱團(tuán)的細(xì)胞就會(huì)死亡。所以,消化傳代的時(shí)候一定要將細(xì)胞消化成單個(gè)單個(gè)的獨(dú)立狀態(tài),這個(gè)啊是非??季磕愕墓Ψ虻模〖?xì)胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個(gè),因?yàn)樗麤](méi)有受力點(diǎn)了。很難找到受力點(diǎn)讓你對(duì)他吹打的力分散開(kāi)細(xì)胞。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開(kāi),受力點(diǎn)就是細(xì)胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴(yán)格控制好消化的程度啊,這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來(lái),又不能太過(guò),一吹就整片脫落,要單個(gè)單個(gè)地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長(zhǎng)狀態(tài)貼壁程度的細(xì)胞能夠都維持在好的受力點(diǎn)分散開(kāi)。這個(gè)是很重要的一點(diǎn)。尤其是對(duì)于某些細(xì)胞這一點(diǎn)就是他活去死的致命點(diǎn)。像Caco-2細(xì)胞就是如此。另外關(guān)于傳代很重要一點(diǎn)就是一定不能等到細(xì)胞長(zhǎng)滿的時(shí)候才去消化傳代。要在細(xì)胞長(zhǎng)到70%左右的時(shí)候就要傳代了,一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)中已經(jīng)有疊層生長(zhǎng)的時(shí)候就要立即進(jìn)行消化傳代。不能再拖了。關(guān)于換液傳代時(shí)候洗瓶的問(wèn)題。對(duì)于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞,你在洗的時(shí)候如果是用無(wú)血清1640去洗細(xì)胞在隨即后的幾次中會(huì)比用DMEM洗的長(zhǎng)的要好。同樣,用1640培養(yǎng)的也有這個(gè)現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話,可以用PBS來(lái)洗,洗的效果和用無(wú)血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的,對(duì)于有些細(xì)胞會(huì)更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清,防止它對(duì)胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先,是很關(guān)鍵的一點(diǎn)。先補(bǔ)充這么多,還會(huì)后續(xù)更新。再補(bǔ)充一點(diǎn):傳代時(shí)PBS洗是很重要的一步,最近發(fā)現(xiàn),用PBS就可以把細(xì)胞消化開(kāi)來(lái)。加入PBS放置10-15分鐘,有些需要更長(zhǎng)的時(shí)間,等到細(xì)胞一個(gè)個(gè)分離開(kāi)來(lái)的時(shí)候,就可以直接吹打下來(lái),但是和胰酶消化一樣,要控制好時(shí)間,不能時(shí)間太過(guò)了,要不然損傷細(xì)胞,細(xì)胞不容易成活,狀態(tài)容易不好。這個(gè)方法對(duì)于某些細(xì)胞是很管用的。有些細(xì)胞用胰酶消化不容易消化成單個(gè)的時(shí)候,或者臨時(shí)沒(méi)有胰酶了,可以選用此方法。不過(guò)一定要試試,看是否適合你的細(xì)胞。 DanG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:207細(xì)胞、TGW細(xì)胞、T2(174 x CEM.T2)細(xì)胞 MM1-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NR8383細(xì)胞、L-M (TK-)細(xì)胞、UMRC2細(xì)胞 GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞 Tb1Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-774細(xì)胞、SUM-52細(xì)胞、BE(2)C細(xì)胞 SF-763細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF SB細(xì)胞、RH8994細(xì)胞、L細(xì)胞:細(xì)胞 SKRC-52細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VA-ES-BJ細(xì)胞、Ly19細(xì)胞、Sci-1細(xì)胞 COLO206F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TC7細(xì)胞、INS1細(xì)胞、MonoMac6細(xì)胞 MOLT16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J774A1細(xì)胞、NCIH292細(xì)胞、NeHepLxHT細(xì)胞 LK2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H3396細(xì)胞、PaTu 8988 S細(xì)胞、PC-3M 2B4細(xì)胞 LTEP-a2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S37細(xì)胞、Intestinal Porcine Epithelial細(xì)胞:-1細(xì)胞、WRL68細(xì)胞 JTC-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H460細(xì)胞、OS-RC-2細(xì)胞、MOLT-4細(xì)胞 MLE12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KATO 3細(xì)胞、Hs 606.T細(xì)胞、SK-ES1細(xì)胞 W256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUC細(xì)胞、SNU-739細(xì)胞、SKMES1細(xì)胞 Walker-Ca.256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu 177細(xì)胞、WSU-DLCL(2)細(xì)胞、KNS42細(xì)胞 NBL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-1 sq細(xì)胞、Highly Aggressively Proliferating Immortalized細(xì)胞、KU19-19細(xì)胞 H226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1882細(xì)胞、SK N SH細(xì)胞、CEM.C1細(xì)胞 TE10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:V-79-4細(xì)胞、GM12878細(xì)胞、MPC5細(xì)胞 GOS-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-837細(xì)胞、8305C_1細(xì)胞、OV-90細(xì)胞 293/EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-180細(xì)胞、Line 870 Emory University-4細(xì)胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone細(xì)胞 Panc 02.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HES [Human embryonic skin fibroblast]細(xì)胞、VK2/E6E7細(xì)胞、CCD-841CoN細(xì)胞 MDA MB 175 VII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細(xì)胞、H-1623細(xì)胞、TO 175.T細(xì)胞 T98G細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS4:11細(xì)胞、130T細(xì)胞、NSI/1-Ag4-1細(xì)胞 CCD841CoN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Molm 14細(xì)胞、Hep2細(xì)胞、Hs742T細(xì)胞 SGC7901細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Daoy細(xì)胞、Tokyo Medical and Dental university 8細(xì)胞、MDA-415細(xì)胞 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