"UT-7細胞:人類原巨核細胞型白血病細胞系 細胞背景資料:該細胞于1988年建系;源于一名64歲患有急性粒細胞白血病(AMLM7)的男性的骨髓;對多種細胞因子有反應。 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:維持細胞濃度在1.0-1.5×106cells/ml,1:2傳代,2-3天1次。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系 細胞生長特性:懸浮生長,有1%~2%的細胞可輕微貼壁。 細胞傳代注意事項:①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材;②每天觀察細胞形態(tài),掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代;③如發(fā)現細胞有污染跡象,應立即采取措施,一般應棄置污染的細胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,并經常更換培養(yǎng)基。傳代細胞的建系和維持:細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。對每一個細胞系來說都有其自身的特點,要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養(yǎng)細胞的凍存及復蘇:細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。 絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質材料的附著已經消失了,細胞之間的附著也已經消失了,細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好。 細胞培養(yǎng)過程中相關問題總結:懸浮性細胞應如何繼代處理?一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg(約1,000rpm),5-10分鐘,過高之轉速,將造成細胞死亡;細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因;細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成;DMSO之等級和無菌過濾之方式為何?冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grade之DMSO,其本身即為無菌狀況,次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于4°C,避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質,并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜;冷凍保存細胞之方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C 30~60分鐘→ (-20°C 30分鐘)→-80°C 16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20°C不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?冷凍管內細胞數目一般為1x10(6)cells/ml vial,融合瘤細胞則以5x10(6)cells/ml vial為宜;應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法;如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?直接滅菌后丟棄之。 J 111細胞系相關產品:NCI-H2030細胞、MRMT-1細胞、L929細胞 GM02132細胞系相關產品:SNU-620細胞、VMM5A細胞、A549ATCC細胞 EFM192C細胞系相關產品:C3H/10T1/2-clone8細胞、LS411N細胞、H3255_DA細胞 PCI-4.2細胞系相關產品:CWR22-R1細胞、D-283細胞、DMS114細胞 EBC-1細胞系相關產品:HCMEC細胞、Institute for Medical Research-32細胞、NCI-H650細胞 GTL16細胞系相關產品:NCI-H1184細胞、H-1341細胞、MBVP細胞 PANC3.27細胞系相關產品:BT-B細胞、AU 565細胞、SNGM細胞 HEK293-FT細胞系相關產品:SVEC 4-10細胞、LM2-4175細胞、PL12細胞 GLRK 13細胞系相關產品:IB-RS-2細胞、RCC_7860細胞、67NR細胞 HDQP1細胞系相關產品:Tissue Culture-1細胞、HuP-T4細胞、Ect1/E6E7細胞 Transformed Human Liver Epithelial-2細胞系相關產品:OKT3細胞、MOLM-13細胞、RAW264細胞 NBL-S細胞系相關產品:CZ-1細胞、H-1395細胞、U-373MG ATCC細胞 OLN93細胞系相關產品:Medical Research Council cell strain-5細胞、Panc 02.03細胞、SCC 15細胞 SBC-3細胞系相關產品:HCC4006細胞、NCIH716細胞、RM-1細胞 YTMLC-90細胞系相關產品:ONS76細胞、CEM.C1細胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1細胞 AML-12細胞系相關產品:HEL 299細胞、H1672細胞、CEF細胞 AML-12細胞系相關產品:HEL 299細胞、H1672細胞、CEF細胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6細胞系相關產品:Tsup-1細胞、P3X63Ag8細胞、HTori-3.1細胞 Nakata-1細胞系相關產品:H2172細胞、JVM-2細胞、NCIADRRES細胞 IA-LM細胞系相關產品:CCD-19Lu細胞、H2009細胞、H-220細胞 M14-MEL細胞系相關產品:MDA-MB 361細胞、SW982細胞、CCD-966SK細胞 PLA801-95D細胞系相關產品:SJSA細胞、Panc05.04細胞、MPC 11細胞 Detroit562細胞系相關產品:NALM-6細胞、OE-33細胞、UCD-MLA-144細胞 CCD-18Co細胞系相關產品:TW 01細胞、NCI-157細胞、A2780 CP70細胞 LY-R細胞系相關產品:EJ1細胞、A498細胞、Colon-26細胞 CAL27細胞系相關產品:MDA MB 231細胞、R.K.13細胞、TO175T細胞 526mel細胞系相關產品:MC3T3-E1(C4)細胞、RPMI7951細胞、HD11細胞 NCI-H520細胞系相關產品:Hs888T細胞、DC2.4細胞、HIEC-6細胞 MOLT 16細胞系相關產品:R.K.13細胞、HANK1細胞、NS20-Y細胞 ROS17/2.8細胞系相關產品:WERI細胞、HOS TE 85細胞、SKNAS細胞 WIL2-S細胞系相關產品:COLO 824細胞、TH1細胞、HRPEpiC細胞 SHI1細胞系相關產品:RAG細胞、U266 Bl細胞、LIM1215細胞 NSI/1-Ag4-1細胞系相關產品:NCI-H2066細胞、Nthy-ori 3.1細胞、alpha TC1 clone 6細胞 SCCVII細胞系相關產品:U-373MG ATCC細胞、Vx-2細胞、SiHa細胞 CAL 12T細胞系相關產品:HOS-TE85細胞、SW-1990細胞、MES-SA/Dx-5細胞 H-2591細胞系相關產品:HTori-3細胞、A549細胞、CCRF CEM細胞 OCI-LY-7細胞系相關產品:HEC-251細胞、SK-ES-1細胞、Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細胞 PF-382細胞系相關產品:HuT-102細胞、Hs888 Lu細胞、SNU-398細胞 SKLMS-1細胞系相關產品:NTERA2D1細胞、ASPC1細胞、16-HBE14o細胞 SW 982細胞系相關產品:Danio rerio Gill細胞、UWB1.289細胞、WERI-Rb 1細胞 Lec1細胞系相關產品:ChaGo-K-1細胞、Caco-2/BBe 1細胞、EOMA細胞 HCV 29細胞系相關產品:Ly19細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細胞、OSRC2細胞 MDA-MB-435-S細胞系相關產品:Kit225-K6細胞、NTERA2D1細胞、Hs 737.T細胞 Hs863T細胞系相關產品:NCIH1836細胞、LC-1細胞、RDES-1細胞 Ramos.2G6.4C10細胞系相關產品:Hepa1-6細胞、NCI-H1915細胞、GC-1 spg細胞 Panc_02_03細胞系相關產品:OCI-LY-19細胞、HCC1954-BL細胞、KU1919細胞 University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14細胞系相關產品:Fortner's melanotic melanoma #3細胞、3T3-442A細胞、HCCC9810細胞 CLL-CII細胞系相關產品:SW13細胞、H-441細胞、D341Med細胞 Medical Research Council cell strain-9細胞系相關產品:NCIH441細胞、T24(ECV304)細胞、H4-II-E-C3細胞 H-2141細胞系相關產品:67NR細胞、TK10細胞、bEND.3細胞 SUP-B1細胞系相關產品:RPMI 7951細胞、Hep-G2細胞、SKLMS1細胞 Swiss/3T3細胞系相關產品:Human Fetal Thymocyte-8810細胞、LL/2 (LLC1)細胞、NCI-H2085細胞 Human Corneal Endothelial Cells-12細胞系相關產品:SGC-7901/DDP細胞、BAEC細胞、UPCI-SCC-154細胞 KATOIII細胞系相關產品:NCI-841細胞、Z310細胞、NIH:OVCAR-4細胞 MES-23.5細胞系相關產品:P3J.HR1K細胞、TMD-8細胞、RT4細胞 SW-626細胞系相關產品:Malme-3 M細胞、TALL 1細胞、SK-N-BE(2)細胞 MPP 89細胞系相關產品:KY180細胞、Sp 2/0-Ag 14細胞、INS1細胞 HEK293S細胞系相關產品:Michigan Cancer Foundation-12A細胞、SUM149PT細胞、LNCaP.FGC細胞 CX-1細胞系相關產品:MIA-Pa-Ca-2細胞、BV-2細胞、GM03320細胞 SCC9細胞系相關產品:NCI-H2135細胞、CCD-841-CoTr細胞、NIH:OVCAR-10細胞 WIL2-S細胞系相關產品:COLO 824細胞、TH1細胞、HRPEpiC細胞 NFS60細胞系相關產品:HUT-125細胞、PLC PRF 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