"hCMEC/D3細胞：永生化人腦微血管內(nèi)皮細胞系
細胞背景資料：腦微血管；內(nèi)皮細胞
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞傳代的一般方法：開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞(單層細胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-０.２%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或１９９等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（１萬單位）、７.５％NaHC０３溶液、０.２５％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(１００m１)、克氏瓶、膠塞、吸管(１０ml、１m１）、細胞吹打管（２０ml）(以上用具需經(jīng)１２１℃至少１５分鐘高壓滅菌)、C０２ 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、４℃、-２０℃冰箱；操作步驟：鏡檢細胞，挑選生長狀態(tài)良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-０.２%LH培養(yǎng)液１００ml內(nèi)，加入滅活小牛血清１０m１，慶大霉素溶液０.３m１，７.５%碳酸鈉溶液３ml。（僅供一般參考）。消化細胞；先用PBS洗液沖洗細胞表面１-２次，每次１０m１，棄去洗液，向細胞瓶內(nèi)加入０.２５％胰蛋白酶溶液，每瓶１m１，細胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細胞表面。至細胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入１０m１細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(１００m１)中，再加入１０m１細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于３７±１℃孵箱培養(yǎng)。約２～４天成片。(由細胞接種濃度決定)；填寫傳代記錄。
CEM-T4細胞系相關產(chǎn)品：MDA-MB 468細胞、OCI-AML-2細胞、MDCK (NBL-2)細胞
ANA-1細胞系相關產(chǎn)品：RBE4細胞、Rat 2細胞、NCI-460細胞
NPC-TW 01細胞系相關產(chǎn)品：SK-OV-3細胞、V79-4細胞、BLO11細胞
Gejiu Lung Carcinoma-82細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1395細胞、87 MG細胞、OCILY-3細胞
SiHa細胞系相關產(chǎn)品：SW 620細胞、HCT8細胞、A.704細胞
SUDHL-2細胞系相關產(chǎn)品：LP-1細胞、SK-N-BE-2細胞、8226細胞
H735細胞系相關產(chǎn)品：Hs 934.T細胞、IPLB-Sf21AE細胞、CAL 12細胞
NRK-52E細胞系相關產(chǎn)品：Wistar Institute, Susan Hayflick細胞、Mia PACA 2細胞、PC9細胞
BLO11細胞系相關產(chǎn)品：H508細胞、H522細胞、C918細胞
SW 13細胞系相關產(chǎn)品：CCD18Co細胞、UMUC-14細胞、CAOV4細胞
HCASMC細胞系相關產(chǎn)品：NR-8383細胞、J-774細胞、MA-104細胞
Z138細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H520細胞、HeLa 229細胞、KATOIII細胞
SU-DHL-2細胞系相關產(chǎn)品：KTA7細胞、KOSC-2 cl3-43細胞、Rainbow Trout Embryo細胞
SK-RC 42細胞系相關產(chǎn)品：SW 13細胞、Hs 870.T細胞、USMC細胞
H-220細胞系相關產(chǎn)品：Cor L51細胞、SV-HUC-1細胞、PK 15細胞
MDA 435細胞系相關產(chǎn)品：SP2細胞、A-375.S2細胞、T47D細胞
MDA 435細胞系相關產(chǎn)品：SP2細胞、A-375.S2細胞、T47D細胞
B16F1細胞系相關產(chǎn)品：870細胞、IPLB-Sf21細胞、BALB/3T3 cl. A31細胞
MGH-U3 (RN)細胞系相關產(chǎn)品：P3X63Ag8細胞、MCF-10 Attached細胞、BV-173細胞
FRO細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H441-4細胞、hUC-MSC細胞、H716細胞
Co 115細胞系相關產(chǎn)品：COLO829細胞、JHH7細胞、NCIH1688細胞
HLF-a細胞系相關產(chǎn)品：TW01細胞、MDAMB330細胞、COLO.205細胞
High-5細胞系相關產(chǎn)品：NCIH446細胞、CL-40細胞、HCC-1359細胞
C33A細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1770細胞、HCC2157細胞、Chinese Hamster Ovary細胞
OCI-Ly 3細胞系相關產(chǎn)品：32Dc3細胞、LA 4細胞、SR-786細胞
OCI Ly19細胞系相關產(chǎn)品：H-3255細胞、M-20細胞、HCC70細胞
MS751細胞系相關產(chǎn)品：INS1細胞、EJ 138細胞、HEK-293 c18細胞
K-562細胞系相關產(chǎn)品：GFP-Olig2細胞、Colo205細胞、H3255細胞
LAN5細胞系相關產(chǎn)品：SW 1463細胞、293GP細胞、H295細胞
Porcine Kidney-15細胞系相關產(chǎn)品：PLA801C細胞、LS-1034細胞、8305C_1細胞
Farage細胞系相關產(chǎn)品：NRK clone 52E細胞、NTera2/D1細胞、H-1522細胞
HSC3細胞系相關產(chǎn)品：Panc3_27細胞、NCI-H498細胞、HuTu-80細胞
CV-1 in Origin Simian-7細胞系相關產(chǎn)品：MCF-7/ADR細胞、U937細胞、Vero C1008細胞
MCM細胞系相關產(chǎn)品：P-36細胞、C3H 10T1/2細胞、MFE280細胞
NCIH295R細胞系相關產(chǎn)品：TI-73細胞、NCIH1755細胞、NCI-H2591細胞
HOS/MNNG細胞系相關產(chǎn)品：H-2347細胞、Centre Antoine Lacassagne-51細胞、JROECL19細胞
OV1063細胞系相關產(chǎn)品：KYSE-30細胞、Colon38細胞、KMS-18細胞
SK-MEL-2細胞系相關產(chǎn)品：SNU638細胞、Mouse Bladder Tumor line-2細胞、CCD 841 CoN細胞
OVCAR 433細胞系相關產(chǎn)品：COLO394細胞、SMMC7721細胞、RPMI 8226細胞
C166細胞系相關產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細胞、NCI-SNU-601細胞、NCI-H847細胞
UMC-11細胞系相關產(chǎn)品：Human Embryo Kidney-2細胞、TSCCa細胞、SNU-620細胞
H524細胞系相關產(chǎn)品：MN-60細胞、H1781細胞、GM3569細胞
CEM T4細胞系相關產(chǎn)品：DHL5細胞、Douglas Foster-1細胞、NPA 87細胞
HOP 92細胞系相關產(chǎn)品：WiDr/S細胞、624mel細胞、DI-TNC1細胞
HaCaT細胞系相關產(chǎn)品：HO-1-N-1細胞、Be Wo細胞、MGSMC細胞
Mono-Mac-6細胞系相關產(chǎn)品：KP-N-NS細胞、OSA細胞、P 815細胞
COLO 320F細胞系相關產(chǎn)品：G-402細胞、IAR-20細胞、Immortalized Human Hepatocytes細胞
HMC-1細胞系相關產(chǎn)品：ML-2細胞、NCI-H711細胞、H35 Reuber細胞
Hs819T細胞系相關產(chǎn)品：HS-766-T細胞、U2OS細胞、INS1-E細胞
MSB-1細胞系相關產(chǎn)品：WEHI3細胞、MC57細胞、NBL-5細胞
ECC 10細胞系相關產(chǎn)品：LC1-Sq細胞、HCC-2218細胞、HEEpiC細胞
HMSC細胞系相關產(chǎn)品：A2780CP細胞、SNU-387細胞、KU.812細胞
X63-Ag8.653細胞系相關產(chǎn)品：LU451細胞、H-196細胞、SHIN3細胞
Medical Research Council cell strain-5細胞系相關產(chǎn)品：SupT1細胞、G 292 Clone A 141B1細胞、IR983F細胞
HUVEC細胞系相關產(chǎn)品：QG-56細胞、HCC0078細胞、CL1-5細胞
NCI-H1155細胞系相關產(chǎn)品：H-146細胞、MDCK-II細胞、RSMC細胞
NOZAWA細胞系相關產(chǎn)品：ME180細胞、NCI-SNU-878細胞、HepaRG細胞
Vx2細胞系相關產(chǎn)品：697細胞、NCIH2196細胞、Psi-2 DAP細胞
HECV細胞系相關產(chǎn)品：CCD 19Lu細胞、NCTC 3960細胞、PANC-28細胞
HRCEC細胞系相關產(chǎn)品：Calu3細胞、McArdle RH-7777細胞、OCI-Ly 10細胞
MDAMB436細胞系相關產(chǎn)品：SW-1990細胞、UMR-106細胞、SJRH-30細胞
NCI-H1930細胞系相關產(chǎn)品：TCC Sup細胞、Hs695細胞、NCI-H1793細胞
OC316細胞系相關產(chǎn)品：COLO320HSR細胞、WEHI-279細胞、Human Embryo Kidney-2細胞
Ly18細胞系相關產(chǎn)品：NCIH28細胞、TC-1 [Mouse lung]細胞、P3.times.63 Ag8.653細胞
JROECL33細胞系相關產(chǎn)品：LS-411N細胞、HEK AD293細胞、OCI-AML5細胞
TE-85 clone 5細胞系相關產(chǎn)品：TE6細胞、MRC-5細胞、FT-293細胞
Be-Wo細胞系相關產(chǎn)品：BC-022細胞、SIRC細胞、3T3(A31)細胞
COLO320-DM細胞系相關產(chǎn)品：HuO9細胞、RBMEC細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞
C-6細胞系相關產(chǎn)品：MRC9細胞、JIMT細胞、GM-637細胞
4T1.2細胞系相關產(chǎn)品：SHG-44細胞、143 B細胞、Colon26細胞
MCF-7/ADR-RES細胞系相關產(chǎn)品：PT67細胞、SMA 560細胞、C32 [Human melanoma]細胞
BNL CL2細胞系相關產(chǎn)品：BT 20細胞、MCA205細胞、Hs 870.T細胞
NPC-TW 01細胞系相關產(chǎn)品：SK-OV-3細胞、LNCaP-C4-2細胞、H-2342細胞
NCIH2085細胞系相關產(chǎn)品：IPI-2I細胞、OCI-AML3細胞、KHYG細胞
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