"Malme-3M Thawing人惡性黑色素瘤細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
Malme-3M Thawing人惡性黑色素瘤細胞系
細胞生長：貼壁
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)：１)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加２-３ml ０.２５%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通常控制在１-２min)；２)鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散；３)取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；４)注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周２-３次)，待細胞密度達到８０%以后重復１項操作或者凍存；特別注意：(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng))１)收到細胞后請盡快更換為含１５%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加１０%的血清，(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過７２小時)；２)貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑６cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)；３)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：４傳代，２天換液１次。
貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法：一、加入胰酶等細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；二、加入胰酶后，鏡下觀察待細胞始脫落時，棄胰酶，加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的細胞先脫落，對腫瘤細胞來說，這部分細胞有可能是惡性程度較高的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，棄之，再加入適量胰酶作用１０s-４０s(根據(jù)細胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞，可以用２%利多卡因消化５-８分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點，直接加酶消化應該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后，用０.０４%的EDTA沖洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室溫孵育５min，棄取大部分EDTA，加入與剩余EDTA等量的胰酶(預熱)總體積１/１０v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不好，有證據(jù)嗎？培養(yǎng)的BASMC：倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶約６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和，并分瓶這種方法簡單、省事；效果很好并且不損失細胞！
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
Malme-3M Thawing人惡性黑色素瘤細胞系
細胞生長特性：混合生長
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結凍時體積會增加約１０%，必須預留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質，應立即停用，更換另一批號的血清。
細胞形態(tài)特性：成纖維細胞
NCIH1781細胞系相關產品：Jijoye細胞、NRK52E細胞、Sarcoma OSteogenic-2細胞
Jurkat E6細胞系相關產品：JHH-2細胞、P3J-HR-1細胞、MOLM13細胞
EOC20細胞系相關產品：COV-434細胞、AgC11x3A細胞、Madin-Darby Canine Kidney細胞
A375細胞系相關產品：LOUNH91細胞、NTC-200細胞、Lewis Lung Cancer細胞
IGR.OV1細胞系相關產品：HT 1197細胞、C38細胞、GM17346細胞
RCK8細胞系相關產品：HCC-1954BL細胞、NCI H929細胞、C3H 10T1/2細胞
A-253細胞系相關產品：RPMI2650細胞、GA-10-Clone-4細胞、SW756細胞
SK-RC 52細胞系相關產品：BLO11細胞、McCoy細胞、Vertebral Cancer of the Prostate細胞
LN-229細胞系相關產品：RGCs細胞、786-0細胞、hSCC-25細胞
AML-12細胞系相關產品：HEL 299細胞、H1672細胞、CEF細胞
SNU-423細胞系相關產品：CNE-2細胞、SRA01/04 (HLE)細胞、CTLA4 Ig-24細胞
EFM192C細胞系相關產品：C3H/10T1/2-clone8細胞、LS411N細胞、H3255_DA細胞
HNE-3細胞系相關產品：SK ES 01細胞、SK 1細胞、HOS-MNNG細胞
NCI-H2141細胞系相關產品：KTA-7細胞、Ca9-22細胞、BIC-1細胞
MGH-UI細胞系相關產品：ASH3細胞、SW-1783細胞、MGH-U1細胞
Mv1.Lu細胞系相關產品：MDA-MB-361細胞、SV40-MES13細胞、CX-1細胞
H-647細胞系相關產品：Kit225/K6細胞、P3X63 AG 8.653細胞、NRK49F細胞
NS653細胞系相關產品：H1869細胞、LAPC-4細胞、PLA-802細胞
SW-1271細胞系相關產品：HeLa/S3細胞、HEK293T/17細胞、DLD 1細胞
VMRCLCD細胞系相關產品：L-5178-Y-R細胞、PaTu-8988s細胞、Astrocyte type I clone細胞
JB-6細胞系相關產品：H322細胞、NCIH740細胞、COLO 824細胞
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UMUC14細胞系相關產品：Mono Mac 1細胞、CT26-clone 25細胞、MNNG-HOS細胞
NCI-H719細胞系相關產品：Ca 9-22細胞、HLEC細胞、JG細胞
CCD-841CoTr細胞系相關產品：Fao細胞、NuTu 19細胞、UPCI-SCC-090細胞
Tb 1-Lu細胞系相關產品：BNL-HCC細胞、NCIH1688細胞、GM07404D細胞
Malme-3M Thawing人惡性黑色素瘤細胞系
TE9細胞系相關產品：GM03569細胞、NCIH838細胞、RPMI-6666細胞
HCC2108細胞系相關產品：BNCL2細胞、MXI細胞、SW1783細胞
Hep G2/C3A細胞系相關產品：HeLa-229細胞、GM05887細胞、SK-MEL28細胞
H-196細胞系相關產品：HCC941122細胞、NCIH510細胞、X63Ag8-653細胞
CAL-39細胞系相關產品：B16 subline B78細胞、EA.hy 926細胞、MC-3T3-E1細胞
PG [Human lung carcinoma]細胞系相關產品：NCIH2009細胞、LWnt3A細胞、CL11細胞
SNT-8細胞系相關產品：Vero E-6細胞、HPAEC細胞、HET-1A細胞
TGW-nu細胞系相關產品：SKNEP細胞、OCI Ly10細胞、TE-85細胞
MV 4;11細胞系相關產品：KYSE 140細胞、CV-1.K細胞、RAW2647細胞
SKES1細胞系相關產品：Madison 109細胞、Hs819.T細胞、HONE1細胞
H-2198細胞系相關產品：KMS-11細胞、NCCIT細胞、JJN-3細胞
MeT5A細胞系相關產品：OCIAML5細胞、H2066細胞、Mouse Forestomach Carcinoma細胞
GES-1細胞系相關產品：HCET細胞、PC-14細胞、GI-1細胞
HITT15細胞系相關產品：CNE-1細胞、Lu-65細胞、HR-1細胞
Ketr-3細胞系相關產品：C42細胞、CCD 966SK細胞、MES-SA/Dx5細胞
BTI-Tn-5B1-4細胞系相關產品：RMC細胞、H1581細胞、OKT 3細胞
SF-763細胞系相關產品：CCRF SB細胞、RH8994細胞、L cell line細胞
DHL4細胞系相關產品：IALM細胞、CALU 1細胞、GDM1細胞
Walker256細胞系相關產品：NCI-H1993細胞、kms 11細胞、624mel細胞
MDAPC2B細胞系相關產品：M07e細胞、H2106細胞、SF539細胞
High 5細胞系相關產品：PANC 327細胞、MA104細胞、MKN7細胞
LICR-HN6細胞系相關產品：NK10a細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-468細胞、T-ALL 1細胞
Stanford University Pediatric T-cell line 1細胞系相關產品：SK-MES1細胞、P3.653細胞、Human Embryonic Skin細胞
Roswell Park Memorial Institute 8402細胞系相關產品：Centre Antoine Lacassagne-39細胞、NCI-H378細胞、CAL-33細胞
KTCTL140細胞系相關產品：H-2009細胞、Evsa-T細胞、COLO 678細胞
PCI-4.2細胞系相關產品：CWR22-R1細胞、D-283細胞、DMS114細胞
KMM-1細胞系相關產品：MCF12F細胞、RPMI 2650細胞、CCRFCEM細胞
KP-N-RT-BM-1細胞系相關產品：OCIAML3細胞、KAT5細胞、578T細胞
MDA-MB 453細胞系相關產品：LoVo細胞、NCI-H727細胞、2780CP細胞
HPDE6c7細胞系相關產品：B16F1細胞、BCPAP細胞、RCC 786-O細胞
FAO-1細胞系相關產品：LS 174 T細胞、CORL23細胞、NCI-H2330細胞
SK-UT-1細胞系相關產品：TE-14細胞、3-LL細胞、HPAEpiC細胞
EB-1細胞系相關產品：SUP-M2細胞、CTLA4 Ig-24細胞、SUD6細胞
Malme-3M Thawing人惡性黑色素瘤細胞系
H1417細胞系相關產品：Jiyoye細胞、GM03671C細胞、GM2131細胞
PanC1細胞系相關產品：TB1 Lu細胞、OLN-93細胞、M-20細胞
PanC1細胞系相關產品：TB1 Lu細胞、OLN-93細胞、M-20細胞
MHCC97-L細胞系相關產品：SKCO1細胞、SACC83細胞、NCI-H2126細胞
H22細胞系相關產品：KYSE 70細胞、Y3Ag1.2.3細胞、Glioma 261細胞
Ra No. 1細胞系相關產品：Hs 852.T細胞、Li-7細胞、TCC-SUP細胞
HFL-I細胞系相關產品：Tregs細胞、HT1376細胞、H-295細胞
A2780 CP70細胞系相關產品：Cor L88細胞、B958細胞、HELA-GFP細胞
DSL-6A/C1細胞系相關產品：OVCAR-420細胞、MDA175細胞、A427細胞
L 1210細胞系相關產品：BHP10-3細胞、NCI-SNU-5細胞、NCI-H2073細胞
P3.times.63 Ag8.653細胞系相關產品：KYSE-520細胞、NCI.H460細胞、MM1-S細胞
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