"NCI-H661 Thawing人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞１９８２年建系，源自一位患有大細(xì)胞肺癌的男性的胸腔積液。該細(xì)胞角蛋白、波形蛋白陽(yáng)性。
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
NCI-H661 Thawing人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進(jìn)行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞；６)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；７)細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定。一般２～３d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。【注意事項(xiàng)】１)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：３—１：５傳代，每周換液２—３次
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，總是會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問(wèn)題，一不留神就會(huì)全盤皆輸。所謂細(xì)胞虐我千百遍，我待細(xì)胞如初戀。下面是貼壁細(xì)胞的保藏方法，希望對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)初學(xué)操作者有所幫助：1)觀察細(xì)胞狀態(tài)：貼壁細(xì)胞密度達(dá)到85-90%，即可以細(xì)胞凍存形式進(jìn)行保藏，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)；2)細(xì)胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細(xì)胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細(xì)胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細(xì)胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞剛開(kāi)始脫落時(shí)，立即轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細(xì)胞狀態(tài)，至細(xì)胞成流沙狀完全脫落，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細(xì)胞離心：將終止消化后的細(xì)胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細(xì)胞凍存：離心后去除細(xì)胞上清液，按照凍存細(xì)胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細(xì)胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應(yīng)的凍存管中，進(jìn)行凍存；6)細(xì)胞保藏：凍存管做好標(biāo)記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱過(guò)夜，將過(guò)夜后的凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中保藏。
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
NCI-H661 Thawing人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化的話(難消化細(xì)胞例外)。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求極高。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤(rùn)洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降(當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率)。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過(guò)影響ECM相關(guān)酶的活性，來(lái)使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過(guò)螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長(zhǎng)消化時(shí)間(如果１０min還消化不徹底的話)，而應(yīng)該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見(jiàn)的操作，因?yàn)镾erum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學(xué)問(wèn)可以講，對(duì)于一些難消化細(xì)胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制trypsin的活性。但對(duì)于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤(rùn)洗即可消化的細(xì)胞，不需要配制如此溶液。
細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣
KMS-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MALME.3M細(xì)胞、TCam 2細(xì)胞、HH [Human lymphoma]細(xì)胞
NCIADRRES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RWPE-1細(xì)胞、CEL細(xì)胞、Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細(xì)胞
COLO 320HSR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A 72細(xì)胞、OV90細(xì)胞、HHL-5細(xì)胞
U-138-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-GT-2細(xì)胞、HNSC細(xì)胞、RIN-m5F細(xì)胞
NCI-H889細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3 88 D1細(xì)胞、MCF.10A細(xì)胞、BCAP37細(xì)胞
A-673細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2085細(xì)胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細(xì)胞、KG-1a細(xì)胞
JB6 Cl 30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-435細(xì)胞、HEY-A8細(xì)胞、NCIH1184細(xì)胞
CCD 966 SK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2780 CP70細(xì)胞、149PT細(xì)胞、BE2-C細(xì)胞
HLE-B3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：2PK-3細(xì)胞、HTSMC細(xì)胞、RPE-hTERT細(xì)胞
MFC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC3T3-L1細(xì)胞、C-Li-7細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細(xì)胞
UMNSAH-DF 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOL1細(xì)胞、SK.MEL.2細(xì)胞、H2052_MM細(xì)胞
293-FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3-NS1/1Ag 4.1細(xì)胞、H-2066細(xì)胞、LADMAC細(xì)胞
Pa18C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-766T細(xì)胞、BSC40細(xì)胞、NCI-441細(xì)胞
Ramos 2G6 4C10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PANC-04-03細(xì)胞、TE-85細(xì)胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞
Hs863T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1836細(xì)胞、NIH:OVCAR-5細(xì)胞、NCIH1048細(xì)胞
MCF7/WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB134VI細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞、IEC6細(xì)胞
L M (TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UT-7細(xì)胞、FRTL-5細(xì)胞、58F細(xì)胞
UCLA-SO-M14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C22細(xì)胞、NCIH1563細(xì)胞、MLE 12細(xì)胞
IEC-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：McA-RH7777細(xì)胞、CTV1細(xì)胞、Kit 225細(xì)胞
HT-1197細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：766T細(xì)胞、GA-10 (Clone 4)細(xì)胞、HCT-8/V細(xì)胞
U 937細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAHY-926細(xì)胞、N1S1細(xì)胞、HBdSMC細(xì)胞
U 937細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAHY-926細(xì)胞、N1S1細(xì)胞、HBdSMC細(xì)胞
MDA361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0038細(xì)胞、RCC 786-O細(xì)胞、QG56細(xì)胞
Normal Rat Kidney-49F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172MG細(xì)胞、Tu177細(xì)胞、HCC-1419細(xì)胞
HCC0038細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-373MG細(xì)胞、Hs688(A)T細(xì)胞、J-774細(xì)胞
HCET細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI H295R細(xì)胞、FM88細(xì)胞、EA.hy 926細(xì)胞
NCI-H661 Thawing人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
T2 (174 x CEM.T2)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Bowes melanoma cells細(xì)胞、NCIH2347細(xì)胞、GP2d細(xì)胞
BC-3-H-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP126細(xì)胞、Lewis Lung細(xì)胞、NBL-3細(xì)胞
TGBC-11-TKB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI7951細(xì)胞、J82 COT細(xì)胞、LC-1 sq細(xì)胞
SNU-620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DoHH2細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞、NCIH1435細(xì)胞
NS1-Ag 4/1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Meat Animal Research Center-145細(xì)胞、AMO-1細(xì)胞、ESC細(xì)胞
HMEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LTEP-sm 1細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞、MDA-MB-134 VI細(xì)胞
NCI-H508細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：293-H細(xì)胞、NCI660細(xì)胞、JVM3細(xì)胞
PE CA PJ34細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-716細(xì)胞、H-2286細(xì)胞、U-hth74細(xì)胞
SU-86-86細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCA 7細(xì)胞、NCIH820細(xì)胞、OVCA8細(xì)胞
SNU-387細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1395細(xì)胞、NCIH1105細(xì)胞、UMNSAH/DF#1細(xì)胞
LCLC-103H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mouse Forestomach Carcinoma細(xì)胞、RPMI 7666細(xì)胞、PA-TU-8988S細(xì)胞
SK-MES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：624-mel細(xì)胞、BBE細(xì)胞、MPP 89細(xì)胞
MDA-MB-468-RED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM346細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞、Me Wo細(xì)胞
HemECs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Beta-TC-6細(xì)胞、H-1184細(xì)胞、COS-7細(xì)胞
MGSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM 115細(xì)胞、Hs675細(xì)胞、16HBE14o-細(xì)胞
F-81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BIC細(xì)胞、WM266細(xì)胞、X63細(xì)胞
KTC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMM39細(xì)胞、3T3 Swiss Albino細(xì)胞、HCC-94細(xì)胞
HSC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC 61 5.3細(xì)胞、HLMVEC細(xì)胞、HT1376細(xì)胞
DMS-114細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB-231細(xì)胞、253J細(xì)胞、293AD細(xì)胞
PC 61.5.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：alpha TC1 clone 6細(xì)胞、SK-MEL-MeWo細(xì)胞、U-251-MG細(xì)胞
Madison 109細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-BL2141細(xì)胞、SK RC 52細(xì)胞、H510細(xì)胞
BV-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKG IIIa細(xì)胞、INS1-E細(xì)胞、Mo7e細(xì)胞
Lewis lung carcinoma line 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA157細(xì)胞、IPEC-1細(xì)胞、SNU119細(xì)胞
NCI-H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL.1ME A.7R.1細(xì)胞、NOZAWA細(xì)胞、Colo16細(xì)胞
Hs895.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMU-S1細(xì)胞、D10細(xì)胞、H1395細(xì)胞
OCI/AML-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC94細(xì)胞、SKNFI細(xì)胞、HC11細(xì)胞
H1963細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK Col 1細(xì)胞、GA-10 clone 4細(xì)胞、MCF-7/ADR細(xì)胞
293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WC00044細(xì)胞、A-2058細(xì)胞、4175細(xì)胞
SCC-25細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ZR75-1細(xì)胞、HUT 28細(xì)胞、RPMI #1846細(xì)胞
ECC10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT116細(xì)胞、AM-38細(xì)胞、UPCISCC090細(xì)胞
U138MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT3細(xì)胞、Y3.AG.1.2.3細(xì)胞、MSTO-211 H細(xì)胞
Hs 611.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PE/CA-PJ34 (clone C12)細(xì)胞、P3/X63-Ag8細(xì)胞、HPAF/CD18細(xì)胞
SK-RC-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PE/CA-PJ34細(xì)胞、BT.549細(xì)胞、COR-L51細(xì)胞
NCI-H661 Thawing人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
SCC 9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MLE-12細(xì)胞、SK-MEL-24細(xì)胞、GM03671C細(xì)胞
A375SM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PBMC細(xì)胞、MKN-7細(xì)胞、SLMT1細(xì)胞
A375SM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PBMC細(xì)胞、MKN-7細(xì)胞、SLMT1細(xì)胞
SupB15WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1944細(xì)胞、IGROV 1細(xì)胞、ME 180細(xì)胞
Psi-2-DAP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAC-E2G8細(xì)胞、IEC-6細(xì)胞、OKa-C-1細(xì)胞
SW-1116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CL1細(xì)胞、Transformed Human Liver Epithelial-3細(xì)胞、MODE-K細(xì)胞
Tissue Culture-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CA-46細(xì)胞、HCC1419細(xì)胞、WC00059細(xì)胞
HUASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HC11細(xì)胞、SKLU01細(xì)胞、hTERT-HME1細(xì)胞
GT1-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LY-R細(xì)胞、BCaP 37細(xì)胞、2B4細(xì)胞
N1S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NTera2 cl.D1細(xì)胞、373MG細(xì)胞、RCF細(xì)胞
HSC3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc3_27細(xì)胞、NCI-H498細(xì)胞、HuTu-80細(xì)胞
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