"Melan-a Adherent小鼠黑色素細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：黑色素細(xì)胞；自發(fā)永生；C５７BL/６
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項：細(xì)胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢？沒錯，就是記得到時間了，拿出來復(fù)蘇。那么，細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢？細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在？活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞：補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至７０%單層時收獲細(xì)胞，計數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整)；凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有)：５-１０% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì)；５-１５%甘油；如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長，應(yīng)在５０%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長２４小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過１.５ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息，做好記錄是非常非常重要的！還有一個最重要的，一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題！細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要；其實，細(xì)胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護(hù)目鏡；盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。
細(xì)胞生長：貼壁
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
Melan-a Adherent小鼠黑色素細(xì)胞系
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
冷凍細(xì)胞解凍程序：依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實驗。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對細(xì)胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于３７°C水槽中回溫，回溫后噴以７０%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入３７°C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在１分鐘內(nèi)全部融化后，以７０%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取１０ml培養(yǎng)基加至T２５或T７５flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T２５或T７５flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對絕大多數(shù)細(xì)胞而言，１%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入５-１０ml培養(yǎng)基中，離心３００xg(約１０００rpm)，５分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
SF-295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HSMC細(xì)胞、SUM-149PT細(xì)胞、Ly8細(xì)胞
IOSE29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C32r細(xì)胞、SCC7細(xì)胞、CORL26細(xì)胞
MDCK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-BR-3細(xì)胞、PNEC30細(xì)胞、293/EBNA-1細(xì)胞
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
MDA MB231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GS-9L細(xì)胞、T-ALL1細(xì)胞、KMST-6細(xì)胞
LM8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ECV 304細(xì)胞、PK-13細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-62細(xì)胞
Renal Carcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LNCaP subline C4-2細(xì)胞、H9c2細(xì)胞、Hs 888.T細(xì)胞
細(xì)胞生長特性：貼壁
Melan-a Adherent小鼠黑色素細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié)：１)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適？血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為５%-１５%，不要低于５%或高過２０%，因為含量過低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足，過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為１０%，可以適量加減；２)何時須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換；３)購買的復(fù)蘇細(xì)胞，為何會有脫落？因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩，收到后可以離心收集；４)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可；５)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–８０°C太久；６)收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
NK10a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HuTu 80細(xì)胞、UMUC14細(xì)胞、SN12PM6細(xì)胞
LM(TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0015細(xì)胞、373 MG細(xì)胞、B/C3T3細(xì)胞
MonoMac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HSC-3細(xì)胞、95C細(xì)胞、C38細(xì)胞
Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-ADR-RES細(xì)胞、SKN-AS細(xì)胞、A-375.S2細(xì)胞
TE-671細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM8細(xì)胞、P3/NS1/Ag4-1細(xì)胞、ROS 17/28細(xì)胞
3T3-A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RBE細(xì)胞、Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細(xì)胞、SupB15WT細(xì)胞
P-388細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ACC-3細(xì)胞、SKNBE2細(xì)胞、HLF細(xì)胞
MV411細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC7細(xì)胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1細(xì)胞、PFSK細(xì)胞
Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMRCLCD細(xì)胞、Hs940.T細(xì)胞、Verda reno細(xì)胞
MMAc.SF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PIEC細(xì)胞、NCIH2452細(xì)胞、CDC/EU.HMEC-1細(xì)胞
SW-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B35細(xì)胞、RH35細(xì)胞、MCF-7B細(xì)胞
H1954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Eca109細(xì)胞、HEK-293-FT細(xì)胞、EAC細(xì)胞
Hs 343.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TN5B14細(xì)胞、HKC細(xì)胞、V79-1細(xì)胞
Melan-a Adherent小鼠黑色素細(xì)胞系
GM2131細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RT-112細(xì)胞、P3-X63-Ag8-6-5-3細(xì)胞、PIEC細(xì)胞
MPC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO-HSR細(xì)胞、CCRF.CEM細(xì)胞、H-2052細(xì)胞
IPLB-Sf21-AE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU1細(xì)胞、H-1648細(xì)胞、MT-2J細(xì)胞
IPLB-Sf21-AE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU1細(xì)胞、H-1648細(xì)胞、MT-2J細(xì)胞
SKNO1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB-175VII細(xì)胞、HCC-1937細(xì)胞、CT26細(xì)胞
143B TK-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03571細(xì)胞、MH-22a細(xì)胞、SK RC 52細(xì)胞
RPMI8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TERT-RPE1細(xì)胞、PLA801-95C細(xì)胞、LIPF178C細(xì)胞
HCC-1500細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKMES1細(xì)胞、Nb-2細(xì)胞、SW-1783細(xì)胞
NIT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NPA 87細(xì)胞、Co-115細(xì)胞、HCC202細(xì)胞
HCCLM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM3細(xì)胞、639 V細(xì)胞、Capan 2細(xì)胞
Ramos 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HBE 135-E6/E7細(xì)胞、SK-N-BE-2c細(xì)胞、Sc-1細(xì)胞
BHP 10-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：W133細(xì)胞、Jurkat clone A3細(xì)胞、RPMI 1788細(xì)胞
CAL 51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Bac 1.2F5細(xì)胞、Hs27細(xì)胞、L540細(xì)胞
NCTC clone 929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB157細(xì)胞、SU-DHL-1細(xì)胞、CCD19Lu細(xì)胞
5637細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：2T細(xì)胞、H292細(xì)胞、SUP T1細(xì)胞
58F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL CL2細(xì)胞、H1395細(xì)胞、NCI-H2135細(xì)胞
Huh 7.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MiaPaCa2細(xì)胞、Lewis Lung Cancer細(xì)胞、SUM 190細(xì)胞
SHZ-88細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PF382細(xì)胞、NCIH1648細(xì)胞、Metastatic Variant 522細(xì)胞
H441細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HHL5細(xì)胞、H748細(xì)胞、MNNG/HOS Clone F-5細(xì)胞
451-LU細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-138 MG細(xì)胞、LY-R細(xì)胞、HOP92細(xì)胞
C-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRC9細(xì)胞、JIMT細(xì)胞、GM-637細(xì)胞
32D CL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H87細(xì)胞、Colo-201細(xì)胞、DAKIKI Clone 1細(xì)胞
RH8994細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SVGp12細(xì)胞、Opossum Kidney細(xì)胞、NCI-H3255細(xì)胞
UCLA NPA-87-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-16細(xì)胞、MHCC97-L細(xì)胞、HCC78細(xì)胞
BALB/c 3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SVHUC細(xì)胞、SUM-159細(xì)胞、H-1573細(xì)胞
CF-1 MEF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-62細(xì)胞、RM1細(xì)胞、NCI-H-82細(xì)胞
NIT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NPA 87細(xì)胞、Co-115細(xì)胞、HCC202細(xì)胞
NCIH1355細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMSC細(xì)胞、D341細(xì)胞、T. T細(xì)胞
JHH-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRC-9細(xì)胞、LP1細(xì)胞、IM95細(xì)胞
Asian Medical Center-Head and Neck cancer-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L 540細(xì)胞、RMC細(xì)胞、P3-X63-Ag8-653細(xì)胞
Dx5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-UMC-11細(xì)胞、Saos2細(xì)胞、GT39細(xì)胞
DAKIKI Clone 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-431細(xì)胞、766T細(xì)胞、LLC-MK-2細(xì)胞
MZCRC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PNT-1A細(xì)胞、YD15細(xì)胞、HLF-a細(xì)胞
Swiss 3T6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM02219D細(xì)胞、C3H/10T1/2-clone8細(xì)胞、KM-12細(xì)胞
BT-325細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU601細(xì)胞、Merwin Plasma Cell tumor-11細(xì)胞、NCI-H87細(xì)胞
H-1299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：T98G細(xì)胞、P116細(xì)胞、MFE 296細(xì)胞
CF PAC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WSU-DLCL(2)細(xì)胞、NCI-H841細(xì)胞、TE12細(xì)胞
MDA MB 175 VII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細(xì)胞、H-1623細(xì)胞、TO 175.T細(xì)胞
HPAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Vero細(xì)胞、FBHE細(xì)胞、SK-SH-SY5Y細(xì)胞
Ha Fe細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1008細(xì)胞、AN3CA細(xì)胞、OVCAR.8細(xì)胞
A375-MEL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 746.T細(xì)胞、SKLU-1細(xì)胞、Porcine Kidney-15細(xì)胞
PANC.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK293T/17細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞、SCC 9細(xì)胞
Melan-a Adherent小鼠黑色素細(xì)胞系
Mahlavu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Sp2/0-Ag14細(xì)胞、MB468細(xì)胞、HO-1-N-1細(xì)胞
HUVEC-C[HUVEC]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：N1S1細(xì)胞、M-07e細(xì)胞、Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細(xì)胞
Hs 636.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EFO-27細(xì)胞、HCC1428細(xì)胞、PAa細(xì)胞
KGN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SO-RB50細(xì)胞、HS688AT細(xì)胞、SKCO1細(xì)胞
Hepatoma-22細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI.H522細(xì)胞、Colo320細(xì)胞、B-104細(xì)胞
NCI-H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL.1ME A.7R.1細(xì)胞、NOZAWA細(xì)胞、Colo16細(xì)胞
L363細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：alpha-TC1-6細(xì)胞、H1568細(xì)胞、S180細(xì)胞
PANC403細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MFM223細(xì)胞、Hs294T細(xì)胞、H-929細(xì)胞
MIA-PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Dakiki細(xì)胞、HSC3細(xì)胞、HCPEpiC細(xì)胞
451Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NS1-1 Ag4.1細(xì)胞、C3H/10T1/2細(xì)胞、A704細(xì)胞
CCRF-CEM/S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc05.04細(xì)胞、MDAMB361細(xì)胞、HCC0015細(xì)胞
MonoMac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HSC-3細(xì)胞、SW-780細(xì)胞、NMCG1細(xì)胞
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