"PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：胚胎；成纖維細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析：總結(jié)１：復(fù)蘇過程沒有問題，是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS １５-２０%，看看能否幫助貼壁，當(dāng)然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細(xì)胞沒問題?？偨Y(jié)２：首先應(yīng)該懷疑凍存，實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小，因?yàn)椴僮骱唵危宜腊?。１、你凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，太長的消化時間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。２、你的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會死亡。３、你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過７%，大于５%，太多也不好。４、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。５、你的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格，很多人容易忘卻這個事情，因?yàn)檫@個東西流程長。６、如果你細(xì)胞污染，你是否能很快看到，我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。７、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有，不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細(xì)胞都污染一個細(xì)菌的話，這個細(xì)菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌，問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜，否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題，這個見得太多了，別不當(dāng)會事。
細(xì)胞生長：貼壁
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約１０%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因?yàn)闀枞^濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會誤認(rèn)為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認(rèn)為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點(diǎn)應(yīng)不會影響細(xì)胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號的血清。
HCT8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3 NS1 Ag4細(xì)胞、G361mel細(xì)胞、MDA MB231細(xì)胞
MDA-361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF7-CTRL細(xì)胞、C-28/I2細(xì)胞、MFE-280細(xì)胞
OV1063細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-30細(xì)胞、Colon38細(xì)胞、KMS-18細(xì)胞
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
MA-104細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Rin-M-5F細(xì)胞、RT4-D6P2T細(xì)胞、UMR106細(xì)胞
MA-104細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Rin-M-5F細(xì)胞、RT4-D6P2T細(xì)胞、UMR106細(xì)胞
Med 341細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：373MG細(xì)胞、HG2855細(xì)胞、U-87 MG細(xì)胞
細(xì)胞生長特性：貼壁
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié)：１)一般客戶拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？客戶收到細(xì)胞后先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞１００X，２００X各一張)，排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過８０%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下１０ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過８０%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、１０００轉(zhuǎn)/分鐘離心２分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制；２)快遞細(xì)胞多久能到，是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞？我們采用快遞發(fā)貨，一般外地２--３天，寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?，如果氣溫低于４度的，則采用郵寄凍存細(xì)胞；３)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活；４)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。
Reuber H-35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：STO細(xì)胞、Hs940-T細(xì)胞、PL 5細(xì)胞
WM2664細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172 MG細(xì)胞、P3J HR1-K細(xì)胞、KYSE 50細(xì)胞
HEK.EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2196細(xì)胞、WM115F細(xì)胞、NCIH226細(xì)胞
WSU-DLCL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UWB1.289+BRCA1細(xì)胞、MuM-2C細(xì)胞、H.Ep.-2細(xì)胞
SW-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B35細(xì)胞、RH35細(xì)胞、MCF-7B細(xì)胞
BE(2)-M17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-774細(xì)胞、A2780細(xì)胞、beta-TC6細(xì)胞
WM-266-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD-966SK細(xì)胞、T-HSC細(xì)胞、MCF-7/ADR-RES細(xì)胞
PANC 203細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE4細(xì)胞、WEHI-3細(xì)胞、L-WRN細(xì)胞
Vero細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H3255細(xì)胞、A-375SM細(xì)胞、32D.3細(xì)胞
SKO-007細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1833細(xì)胞、NBL-5細(xì)胞、HKBML細(xì)胞
Walker 256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-85-1細(xì)胞、GBC-SD細(xì)胞、BHP 10-3細(xì)胞
EOC 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-N-BE(1)n細(xì)胞、HRMC細(xì)胞、CORL23細(xì)胞
OSC-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BE2_C細(xì)胞、MDA 1386細(xì)胞、CL 1-0細(xì)胞
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞系
SN12C-PM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NBL-5細(xì)胞、SK-N-FI細(xì)胞、Strain KB細(xì)胞
ECV304細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H82細(xì)胞、3T3L1細(xì)胞、GOS-3細(xì)胞
CCRF.CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCIAML2細(xì)胞、SUDHL-16細(xì)胞、Hs 688(A).T細(xì)胞
CCRF.CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCIAML2細(xì)胞、SUDHL-16細(xì)胞、Hs 688(A).T細(xì)胞
BC-3-H-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP126細(xì)胞、Lewis Lung細(xì)胞、NBL-3細(xì)胞
IM 9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3 J2細(xì)胞、16HBEo-細(xì)胞、PANC 203細(xì)胞
Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mono Mac 6細(xì)胞、HOS-MNNG細(xì)胞、LN-229細(xì)胞
NB-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LYR細(xì)胞、HEM細(xì)胞、HEK-AD 293細(xì)胞
MN 60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H719細(xì)胞、639-V細(xì)胞、MZCRC1細(xì)胞
RBL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DMS79細(xì)胞、NIH-OVCAR-3細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞
KTCTL-140細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C518細(xì)胞、COLO 684細(xì)胞、H-1954細(xì)胞
OVCAR.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2052細(xì)胞、LCLC103H細(xì)胞、NS1-Ag4細(xì)胞
H460細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Karpas 299細(xì)胞、87MG細(xì)胞、MA 104細(xì)胞
H69C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H522細(xì)胞、MEF (CF-1)細(xì)胞、Jurkat E6-1細(xì)胞
Hs-578-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2196細(xì)胞、OKa-C-1細(xì)胞、H-2228細(xì)胞
Wien 133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1404細(xì)胞、KLM-1細(xì)胞、MNNG細(xì)胞
HuP-T4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LAN-6細(xì)胞、OCI/AML-2細(xì)胞、EL4細(xì)胞
SK-MES-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NEC細(xì)胞、SU-86-86細(xì)胞、Simpson細(xì)胞
NIH:OVCAR4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ly8細(xì)胞、CHL-1細(xì)胞、DK-MG細(xì)胞
UMNSAH-DF 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOL1細(xì)胞、SK.MEL.2細(xì)胞、H2052_MM細(xì)胞
Earle's L cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MGECs細(xì)胞、NCI-SNU-620細(xì)胞、JHH7細(xì)胞
Epithelioma Papulosum Cyprini細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOMA細(xì)胞、McCoy B細(xì)胞、MES-SA Dx5細(xì)胞
Nthy ori 3.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKOV-3細(xì)胞、CAMA1細(xì)胞、RDES細(xì)胞
Baby Hamster Kidney-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMC-11細(xì)胞、SW527細(xì)胞、HCC4006細(xì)胞
CEM/C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2106細(xì)胞、DH-82細(xì)胞、NK-92.05細(xì)胞
Hs27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：K299細(xì)胞、OS-732細(xì)胞、HCC-44細(xì)胞
H2009細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF7細(xì)胞、OC-316細(xì)胞、HEK293-H細(xì)胞
RS4-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1688細(xì)胞、H-292細(xì)胞、C-643細(xì)胞
SAS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GA-10-Clone-4細(xì)胞、NPA細(xì)胞、H-650細(xì)胞
HSF2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF-7細(xì)胞、Homo sapiens No. 578, breast cells細(xì)胞、NCI-H2196細(xì)胞
TE9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03569細(xì)胞、NCIH838細(xì)胞、RPMI-6666細(xì)胞
KYSE-180細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM190細(xì)胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細(xì)胞、SKNBE(1)細(xì)胞
SCC15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1092細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞、Colo699細(xì)胞
RIN-m5F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIN87細(xì)胞、CCC-HHM-2細(xì)胞、639V細(xì)胞
COLO 320DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：4T1.2細(xì)胞、R2C細(xì)胞、C3H/10T1/2 CL8細(xì)胞
MM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Kit225細(xì)胞、Rabbit Kidney 13細(xì)胞、C3A細(xì)胞
NP-69細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-4-II-E細(xì)胞、Huh7.5細(xì)胞、NCIH1105細(xì)胞
GM3190細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RS4-11細(xì)胞、C17.2細(xì)胞、Hep 3B2.1-7細(xì)胞
BEL7402細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS細(xì)胞、2PK3細(xì)胞、Potorous tridactylus Kidney 2細(xì)胞
H-1672細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC3M細(xì)胞、Calu-3細(xì)胞、SK MEL 28細(xì)胞
RH30SJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：End1/E6E7細(xì)胞、TCC-SUP細(xì)胞、HT22細(xì)胞
SK-N-AS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：FDCP-1細(xì)胞、NCI N87細(xì)胞、CCRF細(xì)胞
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞系
Hs895.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMU-S1細(xì)胞、D10細(xì)胞、H1395細(xì)胞
NB19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IHC-ST1細(xì)胞、U-251 MG細(xì)胞、NCI-H1869細(xì)胞
CHL/IU細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-747細(xì)胞、DoTc2細(xì)胞、MOLP8細(xì)胞
KMS11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B 95-8細(xì)胞、HCA-7細(xì)胞、RBMEC細(xì)胞
SACC-83細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM-TK-細(xì)胞、SGC996細(xì)胞、HCC-38細(xì)胞
SKNO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEC-151細(xì)胞、IEC-18細(xì)胞、C32 [Human melanoma]細(xì)胞
KYSE-140細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB-453細(xì)胞、PCI-SG231細(xì)胞、BV-2細(xì)胞
HuT102細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PLA-801D細(xì)胞、RPMI-8226細(xì)胞、NCl-H157細(xì)胞
SK MEL 5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCA 420細(xì)胞、AKR細(xì)胞、Case 3細(xì)胞
SHEE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO320/DM細(xì)胞、SK-Mel 2細(xì)胞、NCIH847細(xì)胞
HEp-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Jurkat-E6細(xì)胞、H-889細(xì)胞、RGC-6細(xì)胞
HEK AD293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3-X63.Ag8.653細(xì)胞、LN229細(xì)胞、SU4細(xì)胞
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