"KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞系
細胞背景資料：結(jié)腸癌
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇，結(jié)果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約１０%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號的血清。
NK92MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 450細胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞、Lu99A細胞
USMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UT7細胞、Hs 840.T細胞、HEK-293-F細胞
ID8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IPI-2I細胞、RA 1細胞、FHs 74 Int細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
TGBC11T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Co 205細胞、CLONE M3細胞、CMT167細胞
NCI-H1963細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IMR-90細胞、MSB1細胞、OsA-CL細胞
Panc 8.13細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-3H-1細胞、TOV-112D細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞
細胞生長特性：貼壁
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
培養(yǎng)細胞真的不難，最關(guān)鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
GM2219C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：AK細胞、HEK 293-EBNA細胞、Loucy細胞
WERI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV3121細胞、AHH1細胞、HAC-84細胞
EAhy926細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs.27細胞、C-33 A細胞、NCI-322細胞
CCRF CEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ARO81-1細胞、MKN 7細胞、2PK-3細胞
IAR-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM1細胞、VA-ES-BJ細胞、BE(2)-M17細胞
CPA 47細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1954-BL細胞、CEM T4細胞、FHL-124細胞
OLN93細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Medical Research Council cell strain-5細胞、Panc 02.03細胞、SCC 15細胞
KPNRTBM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：32D clone3細胞、H 9細胞、CP-70細胞
P-36細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT_116細胞、Chinese Hamster Ovary細胞、VM-CUB-1細胞
H-1437細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-64細胞、L02細胞、PA-TU S細胞
U-373-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC 3T3-E1細胞、WSU-DLCL-2細胞、PANC0327細胞
NCI-H1184細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H748細胞、L363細胞、Hs 870.T細胞
U-373 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-132細胞、Huh7.5.1細胞、GS9L細胞
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞系
LS123細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-68細胞、A-172 MG細胞、HSMC細胞
Lec1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ChaGo-K-1細胞、Caco-2/BBe 1細胞、EOMA細胞
HL 60細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 948細胞、B-104細胞、RERFLCMS細胞
HL 60細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 948細胞、B-104細胞、RERFLCMS細胞
ATDC-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KMST-6細胞、OVCAR-3細胞、MBMEC細胞
NCIH292細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS 683T細胞、Beta-TC-6細胞、BRL細胞
DU 4475細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WRL68細胞、32D.cl3細胞、K562/ADR細胞
Immortalized Human Hepatocytes細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-7721細胞、H-774細胞、CaES-17細胞
B16-BL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C6661細胞、COLO 357細胞、HLEC-B3細胞
Cor L88細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1573細胞、SW-900細胞、CV1細胞
CZ-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ST細胞、EFO-27細胞、HMC細胞
H4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：M1細胞、RPMI-2650細胞、SNU761細胞
786.O細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2347細胞、Caov-3細胞、NCIH1838細胞
Hep-G2/C3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：alpha TC1-6細胞、BJA-B-1細胞、aTC1-6細胞
NCIH1395細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C2-C12細胞、MH-S細胞、BJAB-1細胞
WSU-DLCL-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UWB1.289+BRCA1細胞、MuM-2C細胞、H.Ep.-2細胞
SK RC 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV1-P細胞、3T3-J2細胞、P3X63Ag8細胞
H-2108細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK;293細胞、KM932細胞、HS578細胞
HCC-202細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RT4細胞、NB1-RGB細胞、ND7/23細胞
DHL10細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1793細胞、TB-1 Lu細胞、32D CL3細胞
L cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMC3細胞、M619細胞、MKN 28細胞
NCI-H2087細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW962細胞、2B4細胞、KYSE30細胞
NCI-H841細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL.1ME A.7R.1細胞、NOZAWA細胞、Colo16細胞
NTERA-2 clone D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H226細胞、H-226細胞、C81-61細胞
PE/CA-PJ-34細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-OV-433細胞、SUM52細胞、S-16細胞
KP 4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Saos2細胞、D341Med細胞、CCD 19Lu細胞
CF Pac1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：bEND.3細胞、32D-Cl3細胞、HCC-1588細胞
HET1A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COR-L279細胞、Mv 1 Lu細胞、HAVSMC細胞
Hs 729T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA175細胞、3T3-F442A細胞、SW1463細胞
MADB 106細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT FET細胞、KMS18細胞、KMS18細胞
Jurkat77細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCEC細胞、P3.times.63 Ag8.653細胞、H766T細胞
H-920細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JVM3細胞、SNU475細胞、NCIH2052細胞
H69/P細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mo 59J細胞、SNU-1040細胞、HFT-8810細胞
CT26WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW-264.7細胞、hRMECs細胞、P3JHR-1細胞
SU-DHL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs695細胞、HEC1B細胞、Mono-Mac-6細胞
TE-671細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM8細胞、P3/NS1/Ag4-1細胞、ROS 17/28細胞
HOS-143B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DSL6A/C1細胞、SK_N_FI細胞、RCCJF細胞
DH82細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IM-95細胞、J774 A1細胞、NCIH1793細胞
IBRS2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DoTc2-4510細胞、NCI-H1092細胞、SW780細胞
Hi-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1438細胞、SNU-C2A細胞、As-PC1細胞
BPH-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H711細胞、HEK;293細胞、Hs-746T細胞
NK 10a細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1734細胞、alpha TC1.6細胞、MPP-89細胞
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞系
SK Col 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KOSC-2細胞、NCIH2228細胞、NCI H929細胞
Li-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCTC clone 929細胞、Balb/3T3-4-Cl31細胞、VM-CUB-I細胞
NP69SV40T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC3T3E1細胞、HOEC細胞、MGHU1細胞
KHYG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：no-11細胞、Michigan Cancer Foundation-12A細胞、P30OHK細胞
MDA-MB-231-GFP細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EJ細胞、LuCL4細胞、BTI-Tn-5B1-4細胞
U14細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IFRS1細胞、DR2R 1610細胞、H-1838細胞
Hs895T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 7951細胞、SK-N-AS細胞、MOLP2細胞
SRS-82細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BIC-1細胞、MDA-MB415細胞、UMNSAH-DF-1細胞
NCI-H1650細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P30/0HK細胞、Normal fibroblast-10細胞、SKRC-42細胞
MH7A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HOK細胞、Rat 1細胞、kms 11細胞
T-98細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKml2細胞、SNU-368細胞、NCI-H2347細胞
EAhy926細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs.27細胞、HANK-1細胞、mREC細胞
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