"MDA-MB-231-luc Adherent人乳腺癌細胞系
細胞背景資料:MDA-MB-231來自患有轉(zhuǎn)移乳腺腺癌的51歲女病人的胸水。在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中,它能形成低分化腺癌(III級)。
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題。總結(jié)2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。
細胞生長:貼壁
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
MDA-MB-231-luc Adherent人乳腺癌細胞系
細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應立即停用,更換另一批號的血清。
A-2780細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9c2細胞、SCL-2細胞、BALL1細胞
HCe-8693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLM-16細胞、UACC893細胞、OCIAML5細胞
293-H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI/ADRRES細胞、SKNAS細胞、Vero E-6細胞
細胞傳代方法:1:2傳代
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
MARC-145細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC-26細胞、HUVEC細胞、HOMEC細胞
HO8910/PM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bac12F5細胞、U-118-MG細胞、MUS-M1細胞
MHH-CALL-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC細胞、KYSE 270細胞、OCI/AML-3細胞
細胞生長特性:貼壁生長
MDA-MB-231-luc Adherent人乳腺癌細胞系
細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書
細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
SK-RC 52細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BLO11細胞、McCoy細胞、Vertebral Cancer of the Prostate細胞
SW 900細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H295R-S1細胞、H1563細胞、Tb1.Lu細胞
H2291細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-6細胞、H841細胞、HCV-29細胞
Medical University of Graz-Chordoma 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEH2細胞、CA46細胞、B95-8細胞
EB-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rainbow Trout Embryo細胞、U251n細胞、CHO-S細胞
HCC941122細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1963細胞、Blotchy fibroblast-11細胞、H-1793細胞
CWR22-R1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bat lung細胞、MCF-7B細胞、LS-411細胞
STO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1092細胞、WEHI3B細胞、H-146細胞
RD-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 675.T細胞、MDA453細胞、MES-13細胞
OE33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPMC細胞、Ramos 2G6 4C10細胞、SK Hep1細胞
343 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUD6細胞、alpha-TC1.6細胞、H-747細胞
SF17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC2157細胞、OCI-Ly3細胞、SK-N-BE-2細胞
HHUA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266BL細胞、Hs-578Bst細胞、NK92-MI細胞
MDA-MB-231-luc Adherent人乳腺癌細胞系
RKN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu177細胞、OE33細胞、ECV304細胞
Hs746-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 4475細胞、NCI-H2126細胞、KY-270細胞
RMG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-280細胞、NCI-H2110細胞、H82sclc細胞
RMG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-280細胞、NCI-H2110細胞、H82sclc細胞
mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC/CAR細胞、HEM-L細胞、HuH6細胞
Lu-99A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63 Ag8細胞、HPAF II細胞、CHO K1細胞
SKNO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-151細胞、IEC-18細胞、C32 [Human melanoma]細胞
Duke University 4475細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞
BERH-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MM1-S細胞、HL-7702細胞、Roswell Park Memorial Institute 2650細胞
Murine Carcinoma-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-739細胞、95-D細胞、87MG細胞
McCoy B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU16細胞、NCIH1373細胞、BEL-7405細胞
H1963細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK Col 1細胞、GA-10 clone 4細胞、MCF-7/ADR細胞
KYSE270細胞系相關(guān)產(chǎn)品:2780CP細胞、P3JHR1細胞、BALB/3T3細胞
SHP-77細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG108-15細胞、COLO-679細胞、Hs-27細胞
HSC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 H細胞、HOP 62細胞、WI-38細胞
Loucy細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep G2/C3A細胞、Mc Ardle 7777細胞、Hs294T細胞
SNT-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero E-6細胞、HPAEC細胞、HET-1A細胞
AML 12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit225 K6細胞、NCI-H1882細胞、NCIN87細胞
RCCJF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-1細胞、UMUC1細胞、CLONE M3細胞
Hs 683細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RDES細胞、Hs606細胞、HuH-6細胞
32D CL3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H87細胞、Colo-201細胞、DAKIKI Clone 1細胞
KRC Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L540細胞、B-95-8細胞、McG-1細胞
HFT-8810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1155細胞、TJ905細胞、Capan2細胞
SKGT4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEND細胞、HCC15細胞、CCRF SB細胞
TK10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY70細胞、SK HEP-1細胞、NCI-H1651細胞
MGH-U1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML2細胞、IM-9細胞、GM02219C細胞
MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RINm-5F細胞、3T3-Swiss albino細胞、EBC1細胞
HBEpiC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RWPE-2細胞、SKO3細胞、GM03571細胞
SKMES-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PCI-04B細胞、MDBK細胞、GES1細胞
SHI1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAG細胞、U266 Bl細胞、LIM1215細胞
C2-C12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細胞、WEHI3細胞、KYSE-450細胞
Capan-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1341細胞、NOR 10細胞、NG10815細胞
GM03571細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Fetal Rhesus Kidney-4細胞、HCC-1395細胞、SU86.86細胞
SACC-LM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC6細胞、HCC-1187細胞、Tu-177細胞
HEK-293FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16F10細胞、Jiyoye(P-2003)細胞、High 5細胞
MDA-MB-415細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI.H23細胞、QSG7701細胞、H-1930細胞
Malme3M細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1993細胞、MDCK2細胞、HEP3B2細胞
PTK1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCISCC154細胞、CHP 100細胞、GLRK 13細胞
MSCs(mUCMSCs)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH64細胞、NIH:OVCAR4細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231細胞
PNT1/A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1599細胞、Hs729T細胞、NRK-49F細胞
A-673細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2085細胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細胞、KG-1a細胞
NBL-12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT-K75細胞、GM-637細胞、WI 38細胞
MDA-MB-231-luc Adherent人乳腺癌細胞系
DHL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KASUMI6細胞、C22細胞、LM(TK-)細胞
OCI Ly10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL-1細胞、HD-LM-2細胞、A2780-CP細胞
SCL-II細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C41細胞、LL/2(LLc1)細胞、CCFSTTG1細胞
RPMI7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE(2)-C細胞、HT144細胞、TGW-nu細胞
XWLC-05細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1770細胞、V79-1細胞、Hela-mock細胞
RS 4;11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC5細胞、H-1404細胞、D-341 Med細胞
SU-DHL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU-145細胞、H28細胞、A375-MEL細胞
KP4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS653細胞、F9細胞、VP229細胞
FAO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 174 T細胞、CORL23細胞、NCI-H2330細胞
SUPT-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN14B細胞、RTMC細胞、HBL-100細胞
M210B4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT-20細胞、RBE細胞、OACP4 C細胞
H-2286細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI Rb-1細胞、H2347細胞、CCD19Lu細胞
"