"HuT 78 Lymphoblastoid cells人T淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:皮膚;T淋巴瘤;男性 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 RPMI-2650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-021細(xì)胞、NHLF細(xì)胞、H-1648細(xì)胞 NCI-H64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepaRG細(xì)胞、D-324 Med細(xì)胞、McA-RH7777細(xì)胞 H-1954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV 1063細(xì)胞、ZR75_1細(xì)胞、C-Lu65細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 HuT 78 Lymphoblastoid cells人T淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請(qǐng)勿超過一個(gè)月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因?yàn)闀?huì)阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”,常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會(huì)使此沈淀物增多,更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè),又沒有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng),但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號(hào)的血清。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 GA-10 clone 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P388.D1細(xì)胞、Hs 636 T細(xì)胞、SNU-869細(xì)胞 TFH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW 264.7細(xì)胞、NU-GC-2細(xì)胞、OCILY-10細(xì)胞 DV90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SRA01/04 (HLE)細(xì)胞、RenCa細(xì)胞、373 MG細(xì)胞 MDA157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mink Lung細(xì)胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞、UCLA NPA-87-1細(xì)胞 NCIH1155細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 1034細(xì)胞、IEC18細(xì)胞、Opossum Kidney細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 HuT 78 Lymphoblastoid cells人T淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長(zhǎng),及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 BALB/3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO-ori細(xì)胞、RC-2細(xì)胞、LS-174細(xì)胞 HOP92細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF.7細(xì)胞、OCI-Ly03細(xì)胞、KYSE-270細(xì)胞 CHO K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 78細(xì)胞、NCIH1623細(xì)胞、NCI-H82細(xì)胞 XuanWei Lung Cancer-05細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM 2132細(xì)胞、MFE 280細(xì)胞、R D細(xì)胞 MDA415細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2135細(xì)胞、A 375細(xì)胞、HPDLF細(xì)胞 OVCA 433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Japanese Tissue Culture-28細(xì)胞、HPAF-II細(xì)胞、H-1944細(xì)胞 HCMEC(BL12-H)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR10細(xì)胞、NCI-H1404細(xì)胞、AMO-1細(xì)胞 7404細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:4-1st細(xì)胞、Hs 706.T細(xì)胞、Hs 821.T細(xì)胞 JVM-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3-L1 ad細(xì)胞、Caco-2 BBe細(xì)胞、SaOS-2細(xì)胞 DU4475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP細(xì)胞、MT-4細(xì)胞、KTC1細(xì)胞 HuT 78 Lymphoblastoid cells人T淋巴瘤細(xì)胞系 COLO320HSR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2110細(xì)胞、SuDHL 4細(xì)胞、H2073細(xì)胞 HT-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS578細(xì)胞、HBL-1 [Human diffuse large B-cell lymphoma]細(xì)胞、HcerEpic細(xì)胞 MOLM-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH8994細(xì)胞、Hs 766T細(xì)胞、L-428細(xì)胞 IPLB-SF 21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HITT15細(xì)胞、RIN Cl-5F細(xì)胞、CLL-CII細(xì)胞 H810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-6細(xì)胞、L-929細(xì)胞、SW 756細(xì)胞 VP267細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細(xì)胞、COV-434細(xì)胞、H2029細(xì)胞 VP267細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細(xì)胞、COV-434細(xì)胞、H2029細(xì)胞 Ls-174-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H87細(xì)胞、MC-CAR細(xì)胞、RMS13細(xì)胞 NMCG1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBVSMC細(xì)胞、SaOS-2細(xì)胞、HEK-EBNA細(xì)胞 CCC-HPF-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:rHSC-99細(xì)胞、COLO-205細(xì)胞、U138-MG細(xì)胞 AMO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Th17細(xì)胞、SSP-25細(xì)胞、VP303細(xì)胞 K562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM52細(xì)胞、LWnt-3A細(xì)胞、EO771細(xì)胞 3LL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-22細(xì)胞、PA-TU S細(xì)胞、SH-SY5Y Parental細(xì)胞 RBL-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PFSK1細(xì)胞、B16細(xì)胞、Institute for Medical Research-32細(xì)胞 697細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC3細(xì)胞、CCD 841 CoN細(xì)胞、NCI-H841細(xì)胞 Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-869細(xì)胞、SK-Col-1細(xì)胞、D341細(xì)胞 HEK 293 c18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBEpiC細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細(xì)胞 FRhK4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH508細(xì)胞、CCLP-1細(xì)胞、Tn 5B1-4細(xì)胞 DU 4475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WRL68細(xì)胞、32D.cl3細(xì)胞、K562/ADR細(xì)胞 HMVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H226細(xì)胞、MCF12A細(xì)胞、H4細(xì)胞 MyLa 2059細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 melanoma細(xì)胞、KYSE 520細(xì)胞、mRTEC細(xì)胞 SKLU1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BTI-Tn-5B1-4細(xì)胞、H2085細(xì)胞、CNE2細(xì)胞 NCI-H1993細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PTK 1細(xì)胞、HuH-6細(xì)胞、P3/NS1/Ag4-1細(xì)胞 C4-2 Bone metastatic細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-82細(xì)胞、SW-527細(xì)胞、NBL-7細(xì)胞 SKO3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:143 B細(xì)胞、NCIH460細(xì)胞、CV-1 in Origin Simian-7細(xì)胞 LO2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IOSE 29細(xì)胞、NR 8383細(xì)胞、Hs 695T細(xì)胞 H-1944細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNB.19細(xì)胞、H-35細(xì)胞、Rat 2細(xì)胞 MFE-280細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS3細(xì)胞、JB6Cl30細(xì)胞、L- cell細(xì)胞 BE(2)C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 149PT細(xì)胞、NT2/D1細(xì)胞、BALB/c 3T3 clone A31細(xì)胞 HEK293-FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVEC 4-10細(xì)胞、LM2-4175細(xì)胞、PL12細(xì)胞 EAC-E2G8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR3細(xì)胞、TM-3細(xì)胞、A9 (Hamprecht)細(xì)胞 U251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a細(xì)胞、H-2444細(xì)胞、B16-F10-BL6細(xì)胞 EAC-E2G8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR3細(xì)胞、TM-3細(xì)胞、A9 (Hamprecht)細(xì)胞 H-2009細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTera 2細(xì)胞、SJSA-1細(xì)胞、Caco2-BBE細(xì)胞 ASH3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Michigan-Renal Carcinoma-2細(xì)胞、MM1細(xì)胞、NCTC-929細(xì)胞 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