"JeKo-1 Lymphoblastoid cells人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:一位套細(xì)胞淋巴瘤患者的巨細(xì)胞變種顯示白血病轉(zhuǎn)變,從其外周血單核細(xì)胞出發(fā)建立了MCL細(xì)胞株JeKo-1。 JeKo-1細(xì)胞EB病毒陰性,并表達(dá)一種B細(xì)胞表型的IgM。 細(xì)胞過表達(dá)cyclin D1, Bcl-2, c-Myc 及 Rb 蛋白。 Bcl-1/J(H)基因重排得到了PCR證實(shí)。 JeKo-1細(xì)胞在SCID小鼠中高成瘤。 [PubMed: 9753063] 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無(wú)異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來(lái)看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。 KYSE 270細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP92細(xì)胞、Hs739T細(xì)胞、G-361細(xì)胞 MO59J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PIG3細(xì)胞、LICR-LON-HN6細(xì)胞、TE7細(xì)胞 32D.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TKB-1細(xì)胞、Hs 636.T細(xì)胞、Capan1細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 JeKo-1 Lymphoblastoid cells人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請(qǐng)勿超過一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無(wú)菌,不需再無(wú)菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因?yàn)闀?huì)阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”,常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會(huì)使此沈淀物增多,更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè),又沒有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng),但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號(hào)的血清。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。 NCI-H226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Doubling time: ~50 hours (ATCC).細(xì)胞、H820細(xì)胞、RA細(xì)胞 COLO-320-DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GEO細(xì)胞、KYSE-520細(xì)胞、SW1353細(xì)胞 UMC11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-373-MG細(xì)胞、KRC/Y細(xì)胞、NTERA-2 cl.D1細(xì)胞 Mink Lung細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1915細(xì)胞、HCC-44細(xì)胞、LNCaP clone FGC細(xì)胞 Farage OL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:F-36P細(xì)胞、SK-RC 52細(xì)胞、SK-MEL5細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 JeKo-1 Lymphoblastoid cells人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無(wú)措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無(wú)菌操作,多噴噴酒精,要是對(duì)滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè);4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 N-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK15細(xì)胞、MSF細(xì)胞、CG4細(xì)胞 HNTEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-SA細(xì)胞、NRK clone 52E細(xì)胞、MCM細(xì)胞 CWR22-R1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bat lung細(xì)胞、MCF-7B細(xì)胞、LS-411細(xì)胞 KYSE270細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:2780CP細(xì)胞、P3JHR1細(xì)胞、BALB/3T3細(xì)胞 SH-SY5Y Parental細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-70細(xì)胞、YD38細(xì)胞、Calu6細(xì)胞 IPLB-Sf21-AE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU1細(xì)胞、H-1648細(xì)胞、MT-2J細(xì)胞 A-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAD 2細(xì)胞、IOSE 29細(xì)胞、ETCC-007細(xì)胞 CMT167細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1/1-Ag4.1細(xì)胞、LIM-1215細(xì)胞、MC/CAR細(xì)胞 OE-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colon26細(xì)胞、Jurkat E6.1細(xì)胞、H250細(xì)胞 HTori3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM637A細(xì)胞、MDA330細(xì)胞、P30/Ohkubo細(xì)胞 JeKo-1 Lymphoblastoid cells人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 ATDC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L23/P細(xì)胞、RGC-6細(xì)胞、Calf Pulmonary Artery 47細(xì)胞 T-98G細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 320DM細(xì)胞、TC7細(xì)胞、MV-522細(xì)胞 Hs445細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-39細(xì)胞、CAL85-1細(xì)胞、CEM-C1細(xì)胞 Detroit 562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL6細(xì)胞、PaTu 8988s細(xì)胞、Hs746T細(xì)胞 Jurkat, Clone E6-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2452細(xì)胞、HEYA8細(xì)胞、MC3T3E1細(xì)胞 VeroC1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞、CEMO-1細(xì)胞、EST81細(xì)胞 Panc327細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL-1細(xì)胞、BEL-7402細(xì)胞、COLO-320HSR細(xì)胞 HRIF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV-1細(xì)胞、Madin-Darby Bovine Kidney細(xì)胞、MCF-10A細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-174細(xì)胞、H-889細(xì)胞、Jurkat-E6細(xì)胞 MDA361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0038細(xì)胞、RCC 786-O細(xì)胞、QG56細(xì)胞 HLE B-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細(xì)胞、Ly1細(xì)胞、CZ-1細(xì)胞 NCI-H1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-520細(xì)胞、MESSA細(xì)胞、H-748細(xì)胞 Hs 695T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞、L-6細(xì)胞、Hos TE-85細(xì)胞 U-373-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC 3T3-E1細(xì)胞、WSU-DLCL-2細(xì)胞、PANC0327細(xì)胞 HN-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ANA-1細(xì)胞、MDA-MB 453細(xì)胞、OSA細(xì)胞 H4-IIE-C3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 27細(xì)胞、Human Embryonic Kidney 293細(xì)胞、Walker-Ca.256細(xì)胞 SU-DHL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT78細(xì)胞、NCI-H661細(xì)胞、IOSE-29細(xì)胞 CLONE M3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63-Ag 8.653細(xì)胞、A3細(xì)胞、HPAF-II細(xì)胞 SW839細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-2細(xì)胞、Kit 225 K6細(xì)胞、SNU182細(xì)胞 OAW 42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMG-I細(xì)胞、ME-180細(xì)胞、RPMI no 8226細(xì)胞 L(TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC57G細(xì)胞、SUNE-1細(xì)胞、RKO-AS-45-1細(xì)胞 AKR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA-TU S細(xì)胞、RS 4;11細(xì)胞、184A1細(xì)胞 CMT-167細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCLC21H細(xì)胞、Hs-578-T細(xì)胞、SU8686細(xì)胞 SW 579細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ATN-1細(xì)胞、WM 115細(xì)胞、EPC細(xì)胞 HuNS1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HHFK細(xì)胞、MPASMC細(xì)胞、ACHN細(xì)胞 YES-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H889細(xì)胞、OCI-LY-18細(xì)胞、BNL 1MEA.7R.1細(xì)胞 Hs683T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1836細(xì)胞、PBL細(xì)胞、HTori3細(xì)胞 KE-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs706T細(xì)胞、SUP-B1細(xì)胞、T47D:A細(xì)胞 H-187細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs27F細(xì)胞、MDA-MB468細(xì)胞、JTC-39細(xì)胞 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