"SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細胞系 細胞背景資料:成纖維細胞;男性 細胞形態(tài):成纖維細胞樣 細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題。總結(jié)2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 SW839細胞系相關產(chǎn)品:RC-2細胞、Kit 225 K6細胞、SNU182細胞 QGP-1細胞系相關產(chǎn)品:BALB 3T3 clone A31細胞、HSC-1細胞、JB6 Cl 30細胞 CA 46細胞系相關產(chǎn)品:D283 Med細胞、WERI-Rb 1細胞、Colo741細胞 細胞生長:貼壁 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 HEL-92-1-7細胞系相關產(chǎn)品:HCC-70細胞、Panc-3_27細胞、BNL.1ME A.7R.1細胞 Pt-K2細胞系相關產(chǎn)品:MDA 231-LM2-4175細胞、HFT-8810細胞、HKF細胞 H250細胞系相關產(chǎn)品:VM-CUB1細胞、RERF-LC-MS細胞、NU-GC-2細胞 SUD6細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1623細胞、RCS細胞、Walker-256-TC細胞 PC 61 5.3細胞系相關產(chǎn)品:NE1-E6E7細胞、ST2細胞、HT 1197細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 P3X63Ag8653細胞系相關產(chǎn)品:A704細胞、CHO cell clone K1細胞、HEC-1B細胞 GM 637細胞系相關產(chǎn)品:TALL 1細胞、MV-1-Lu細胞、HCT15細胞 Hs821T細胞系相關產(chǎn)品:ATC241細胞、HCC2279細胞、MZ-CRC-1細胞 CCC-HEL-1細胞系相關產(chǎn)品:SF763細胞、MDA.MB.231細胞、WM-266-mel細胞 HepG2細胞系相關產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-148細胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細胞、JKT1細胞 U343細胞系相關產(chǎn)品:HEK AD293細胞、FO [Mouse myeloma]細胞、SKNBE(2)細胞 H-1623細胞系相關產(chǎn)品:HOP-92細胞、Caki-2細胞、MFM-223細胞 H3255細胞系相關產(chǎn)品:RCC-4細胞、KP4細胞、KU-812F細胞 L-5178-Y-R細胞系相關產(chǎn)品:WPE-int細胞、SW260細胞、OUMS23細胞 AtT 20細胞系相關產(chǎn)品:HN13細胞、A549/ATCC細胞、MCF7/WT細胞 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細胞系 MDA-MB-231細胞系相關產(chǎn)品:KYSE70細胞、MLA-144細胞、CTX TNA2細胞 Bac12F5細胞系相關產(chǎn)品:RERF-LCMS細胞、WEHI 164細胞、H-28細胞 H-2023細胞系相關產(chǎn)品:Kelly細胞、NCI-H102細胞、Reh細胞 Sup T-1細胞系相關產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細胞、MC116細胞、SK-MEL-MeWo細胞 CCD1112Sk細胞系相關產(chǎn)品:NB1RGB細胞、BL6細胞、MV-4:11細胞 Co320細胞系相關產(chǎn)品:HOMEC細胞、H-508細胞、SU-DHL1細胞 Co320細胞系相關產(chǎn)品:HOMEC細胞、H-508細胞、SU-DHL1細胞 GM-346細胞系相關產(chǎn)品:OVHM細胞、KM H-2細胞、NBLS細胞 LMTK-細胞系相關產(chǎn)品:ECV細胞、MUM2B細胞、MOLM-13細胞 L 929細胞系相關產(chǎn)品:SUNE-1細胞、HPAF-II/CD18細胞、H711細胞 B-16細胞系相關產(chǎn)品:SU-86-86細胞、U-2 OS細胞、H1975細胞 BA/F3細胞系相關產(chǎn)品:DSL-6A-C1細胞、HEP-3B2細胞、MDA-MB468細胞 LA-N-5細胞系相關產(chǎn)品:Merwin Plasma Cell tumor-11細胞、NIH:OVCAR-8細胞、LAD-2細胞 C4-I細胞系相關產(chǎn)品:BpRc1細胞、D-341 Med細胞、Hs 888.Lu細胞 HR-1細胞系相關產(chǎn)品:HEK293F細胞、Walker-256-TC細胞、SNU638細胞 SNU368細胞系相關產(chǎn)品:NB-4細胞、GM02219細胞、Detroit562細胞 CEK細胞系相關產(chǎn)品:BEAS 2B細胞、HS 445T細胞、Calu-1細胞 Hs 274細胞系相關產(chǎn)品:CFPAC-1細胞、TK-10細胞、AML 12細胞 TU 686細胞系相關產(chǎn)品:NF639細胞、KOPN8細胞、N-Tera-2細胞 HCC0044細胞系相關產(chǎn)品:C-4 I細胞、Hs 852.T細胞、VERO76細胞 NCIH2073細胞系相關產(chǎn)品:BCECs細胞、L23/P細胞、ECC1細胞 GC-1細胞系相關產(chǎn)品:Normal Rat Kidney-52E細胞、Hs 695T細胞、GM05372E細胞 C4 I細胞系相關產(chǎn)品:Alexander cells細胞、CWR-22rv1細胞、CC-LP-I細胞 GM01232E細胞系相關產(chǎn)品:P3.times.63 Ag8.653細胞、CATH.a細胞、RS 4;11細胞 D341細胞系相關產(chǎn)品:hFOB1.19細胞、CAL-120細胞、KASUMI6細胞 DU 145細胞系相關產(chǎn)品:Fetal Human Lens-124細胞、McA-RH 8994細胞、U118-MG細胞 SK Mel 2細胞系相關產(chǎn)品:VK2細胞、H.Ep. No. 2細胞、GH3細胞 BNCL-2細胞系相關產(chǎn)品:CAKI 2細胞、QGY-7701細胞、A72細胞 aTC1-6細胞系相關產(chǎn)品:WM115mel細胞、P31FUJ細胞、RCC-4細胞 Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞系相關產(chǎn)品:SUDHL4細胞、HT細胞、HCEC-B4G12細胞 ID8/MOSEC細胞系相關產(chǎn)品:QGP1細胞、NCIN87細胞、ADR-RES細胞 H146細胞系相關產(chǎn)品:NCTC 3960細胞、CWR22-Rv1細胞、HFLS-OA細胞 HCC9204細胞系相關產(chǎn)品:BEL 7402細胞、RKO_AS45細胞、Roswell Park Memorial Institute 7666細胞 KMY1022細胞系相關產(chǎn)品:OCILY-19細胞、CT26.CL25細胞、HCC0095細胞 H865細胞系相關產(chǎn)品:HEK 293FT細胞、B16F0細胞、R-1059-D細胞 EM-3細胞系相關產(chǎn)品:WERI-Rb-1細胞、SUP T1細胞、CNE-2細胞 SF-539 BT細胞系相關產(chǎn)品:SCL1細胞、Liver-02細胞、RMC細胞 MDA-MB-468細胞系相關產(chǎn)品:V79-4細胞、H82細胞、Ra No. 1細胞 OV-2008細胞系相關產(chǎn)品:IPAM-WT細胞、MHCCLM3細胞、R1610細胞 HeLa 229細胞系相關產(chǎn)品:NTERA-2cl.D1細胞、LS 180細胞、FRTL5細胞 DMS 273細胞系相關產(chǎn)品:AN-3細胞、OCI-Ly7細胞、Hs940-T細胞 NF639細胞系相關產(chǎn)品:MKN74細胞、MDAPCa-2b細胞、SJRH 30細胞 HSCT6細胞系相關產(chǎn)品:LSECs細胞、BI-Mel細胞、SVGp12細胞 MDA-MB 468細胞系相關產(chǎn)品:U373細胞、SKMEL5細胞、ARPE19細胞 9L細胞系相關產(chǎn)品:ZYM-DIEC02細胞、Homo sapiens No. 578, tumor cells細胞、HCC1008細胞 OUMS23細胞系相關產(chǎn)品:LA795細胞、WEHI-164細胞、Panc 03.27細胞 3T6細胞系相關產(chǎn)品:L cells細胞、alpha TC1-6細胞、OV 1063細胞 COLO824細胞系相關產(chǎn)品:U87MG細胞、G422細胞、H146細胞 SNU-638細胞系相關產(chǎn)品:Hu-P-T4細胞、VeroC1008細胞、Anip[973]細胞 Duke University 4475細胞系相關產(chǎn)品:SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞 CHO/dhFr-細胞系相關產(chǎn)品:MDBK細胞、NOK細胞、HT 115細胞 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細胞系 SUM-52PE細胞系相關產(chǎn)品:GM01232E細胞、LLC-PK1細胞、U-226AR1細胞 KBM-7/Hap8細胞系相關產(chǎn)品:HEP3B2細胞、MDCK2細胞、Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1細胞 H647細胞系相關產(chǎn)品:DMS-273細胞、HDQ-P1細胞、H-146細胞 Hs819T細胞系相關產(chǎn)品:HS-766-T細胞、MDA-MB-231-luc細胞、SUIT 2細胞 "
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