"SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:成纖維細(xì)胞;男性 細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱唵?,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問題,太長的消化時(shí)間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見得太多了,別不當(dāng)會事。 SW839細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-2細(xì)胞、Kit 225 K6細(xì)胞、SNU182細(xì)胞 QGP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BALB 3T3 clone A31細(xì)胞、HSC-1細(xì)胞、JB6 Cl 30細(xì)胞 CA 46細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D283 Med細(xì)胞、WERI-Rb 1細(xì)胞、Colo741細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對其進(jìn)行檢測,而且它對細(xì)胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 HEL-92-1-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-70細(xì)胞、Panc-3_27細(xì)胞、BNL.1ME A.7R.1細(xì)胞 Pt-K2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA 231-LM2-4175細(xì)胞、HFT-8810細(xì)胞、HKF細(xì)胞 H250細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VM-CUB1細(xì)胞、RERF-LC-MS細(xì)胞、NU-GC-2細(xì)胞 SUD6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1623細(xì)胞、RCS細(xì)胞、Walker-256-TC細(xì)胞 PC 61 5.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE1-E6E7細(xì)胞、ST2細(xì)胞、HT 1197細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。 P3X63Ag8653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A704細(xì)胞、CHO cell clone K1細(xì)胞、HEC-1B細(xì)胞 GM 637細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL 1細(xì)胞、MV-1-Lu細(xì)胞、HCT15細(xì)胞 Hs821T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ATC241細(xì)胞、HCC2279細(xì)胞、MZ-CRC-1細(xì)胞 CCC-HEL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF763細(xì)胞、MDA.MB.231細(xì)胞、WM-266-mel細(xì)胞 HepG2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-148細(xì)胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細(xì)胞、JKT1細(xì)胞 U343細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK AD293細(xì)胞、FO [Mouse myeloma]細(xì)胞、SKNBE(2)細(xì)胞 H-1623細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP-92細(xì)胞、Caki-2細(xì)胞、MFM-223細(xì)胞 H3255細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC-4細(xì)胞、KP4細(xì)胞、KU-812F細(xì)胞 L-5178-Y-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WPE-int細(xì)胞、SW260細(xì)胞、OUMS23細(xì)胞 AtT 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HN13細(xì)胞、A549/ATCC細(xì)胞、MCF7/WT細(xì)胞 SUSM-1 fibroblast cells人肺成纖維細(xì)胞系 MDA-MB-231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE70細(xì)胞、MLA-144細(xì)胞、CTX TNA2細(xì)胞 Bac12F5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERF-LCMS細(xì)胞、WEHI 164細(xì)胞、H-28細(xì)胞 H-2023細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kelly細(xì)胞、NCI-H102細(xì)胞、Reh細(xì)胞 Sup T-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細(xì)胞、MC116細(xì)胞、SK-MEL-MeWo細(xì)胞 CCD1112Sk細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB1RGB細(xì)胞、BL6細(xì)胞、MV-4:11細(xì)胞 Co320細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOMEC細(xì)胞、H-508細(xì)胞、SU-DHL1細(xì)胞 Co320細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOMEC細(xì)胞、H-508細(xì)胞、SU-DHL1細(xì)胞 GM-346細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVHM細(xì)胞、KM H-2細(xì)胞、NBLS細(xì)胞 LMTK-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECV細(xì)胞、MUM2B細(xì)胞、MOLM-13細(xì)胞 L 929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE-1細(xì)胞、HPAF-II/CD18細(xì)胞、H711細(xì)胞 B-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-86-86細(xì)胞、U-2 OS細(xì)胞、H1975細(xì)胞 BA/F3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DSL-6A-C1細(xì)胞、HEP-3B2細(xì)胞、MDA-MB468細(xì)胞 LA-N-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Merwin Plasma Cell tumor-11細(xì)胞、NIH:OVCAR-8細(xì)胞、LAD-2細(xì)胞 C4-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BpRc1細(xì)胞、D-341 Med細(xì)胞、Hs 888.Lu細(xì)胞 HR-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293F細(xì)胞、Walker-256-TC細(xì)胞、SNU638細(xì)胞 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