"F98 epithelioid cells大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:惡性膠質(zhì)瘤;雌性;Fischer大鼠 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 THLE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:7860細(xì)胞、SCC90細(xì)胞、SNK-6細(xì)胞 CHG5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2-M17細(xì)胞、OCI-Ly1細(xì)胞、UCLA-SO-M20細(xì)胞 MM-1S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C12細(xì)胞、Human Embryonic Skin細(xì)胞、G 292 Clone A 141B1細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 F98 epithelioid cells大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞 HCC94細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-2218細(xì)胞、AN-3細(xì)胞、H2227細(xì)胞 P3J HR-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02219C細(xì)胞、NCI.H23細(xì)胞、MDA-MB-231-luc細(xì)胞 NCI-H508細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293-H細(xì)胞、NCI660細(xì)胞、JVM3細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep-3B細(xì)胞、KM12 SM細(xì)胞、HEK293E細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 F98 epithelioid cells大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 ACC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH226細(xì)胞、U373 MG細(xì)胞、Pt K1 (NBL-3)細(xì)胞 HCC-44細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NU-GC-2細(xì)胞、BLO11細(xì)胞、TH1細(xì)胞 H322T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H676B細(xì)胞、MV-522細(xì)胞、U138MG細(xì)胞 Colon26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ABE8.1/2細(xì)胞、TE 85.T細(xì)胞、BCECs細(xì)胞 H-345細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79細(xì)胞、X63.Ag8.653細(xì)胞、MDA-PCa-2b細(xì)胞 UCH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBZY1細(xì)胞、H-650細(xì)胞、P3J HR1-K細(xì)胞 LLC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JHH-7細(xì)胞、MDA-MB435細(xì)胞、JROECL33細(xì)胞 RCK-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Arizona Cell Culture-893細(xì)胞、WC00079細(xì)胞、RPMI 7666細(xì)胞 Mouse podocyte細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC 813細(xì)胞、MEC-1細(xì)胞、L5178Y-R細(xì)胞 U373-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Melanoma Cell Bowes細(xì)胞、HCC1954細(xì)胞、Me-Wo細(xì)胞 F98 epithelioid cells大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 KBM-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY-50細(xì)胞、GS-9L細(xì)胞、SK-N-MC細(xì)胞 KMY1022細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY-19細(xì)胞、CT26.CL25細(xì)胞、HCC0095細(xì)胞 Strain KB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:6-T CEM細(xì)胞、RPMI 8226細(xì)胞、H-1792細(xì)胞 UCH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBZY1細(xì)胞、H-650細(xì)胞、P3J HR1-K細(xì)胞 H-1819細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:5637細(xì)胞、SKNDZ細(xì)胞、OCI-Ly3細(xì)胞 OCI/AML-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IGR.OV1細(xì)胞、PTK 2細(xì)胞、COLO 16細(xì)胞 MOLT 16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:R.K.13細(xì)胞、HANK1細(xì)胞、NS20-Y細(xì)胞 MDA2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WC00079細(xì)胞、LC1/Sq細(xì)胞、NCTC clone 1469細(xì)胞 SNU-407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-44細(xì)胞、SK UT 1細(xì)胞、TE-1細(xì)胞 NTera2/D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK13細(xì)胞、LOUNH91細(xì)胞、HEK293A細(xì)胞 SW-1573細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDBK (NBL-1)細(xì)胞、IM 9細(xì)胞、NR 8383細(xì)胞 MT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B6Tert-1細(xì)胞、XWLC-05細(xì)胞、MRC-5細(xì)胞 BSC-40細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC/9細(xì)胞、WiDrTC細(xì)胞、ANA1細(xì)胞 Malme-3 M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS-62細(xì)胞、NS1-Ag 4/1細(xì)胞、SRS-82細(xì)胞 RGM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C1R細(xì)胞、HT-29細(xì)胞、SKMel-28細(xì)胞 10T1/2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BGC-823細(xì)胞、MT2細(xì)胞、NTERA2細(xì)胞 HO1-N1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-8細(xì)胞、Dakiki細(xì)胞、YH-13細(xì)胞 KRC/Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMM5細(xì)胞、GT1-1細(xì)胞、P31/FUJ細(xì)胞 SRA01/04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-149PT細(xì)胞、MAEC細(xì)胞、Colo-201細(xì)胞 HTSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIM-1215細(xì)胞、Ej138細(xì)胞、HTori-3細(xì)胞 Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs600T細(xì)胞、NCI-SNU-182細(xì)胞、NRK clone 52E細(xì)胞 HPAF-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L Wnt-3A細(xì)胞、NCI-H2107細(xì)胞、HMC3細(xì)胞 Experimental Mammary Tumour-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE 354.T細(xì)胞、bEND.3細(xì)胞、QGY7703細(xì)胞 Hs 822.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-MC細(xì)胞、CV 1細(xì)胞、GCT0404細(xì)胞 LNCaP C4-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW480E細(xì)胞、DI TNC-1細(xì)胞、NK92細(xì)胞 HT55細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 159PT細(xì)胞、UM-UC-14細(xì)胞、ML-2細(xì)胞 NCI-SNU-423細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNE2細(xì)胞、JKT-1細(xì)胞、PMVEC細(xì)胞 HEK293-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNMC細(xì)胞、OCI AML4細(xì)胞、U87MG細(xì)胞 Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs729T細(xì)胞、BMU-S1細(xì)胞、Rca-B細(xì)胞 Kit225/K6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J111細(xì)胞、GM00215細(xì)胞、OCI-AML4細(xì)胞 HK2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly 10細(xì)胞、2E8細(xì)胞、H-4-II-E細(xì)胞 HCC70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1819細(xì)胞、KHYG-1細(xì)胞、MCF-10 Attached細(xì)胞 HEC-251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM17346細(xì)胞、SV40-MES13細(xì)胞、MDA-MB361細(xì)胞 LAN5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1463細(xì)胞、293GP細(xì)胞、H295細(xì)胞 HN4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA4細(xì)胞、MDA361細(xì)胞、H-1618細(xì)胞 EOC-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-10細(xì)胞、KYSE-30細(xì)胞、MTC-TT細(xì)胞 ECC 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-2細(xì)胞、J774細(xì)胞、3T3 J2細(xì)胞 Lu-65細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LO2細(xì)胞、NCIH661細(xì)胞、MDAMB175細(xì)胞 SW260細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-10細(xì)胞、PLMVEC細(xì)胞、PG-4(S+L-)細(xì)胞 NU-GC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK-1細(xì)胞、Ramos G6.C10細(xì)胞、BERH-2細(xì)胞 HCS-2/8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 c18細(xì)胞、PVEC細(xì)胞、GM03570細(xì)胞 MDA-157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJ-RH30細(xì)胞、HES [Human embryonic skin 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774A.1細(xì)胞、GM00637I細(xì)胞 H295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T173細(xì)胞、Rainbow Trout Embryo細(xì)胞、MT-3 [Human leukocytes]細(xì)胞 "
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