"MIHA epithelioid cells正常人肝細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:肝 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過(guò)大生存空間不足而引起營(yíng)養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng);細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%;細(xì)胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟:1.將長(zhǎng)成的培養(yǎng)細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺(tái)中倒掉瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液,加入少許消化液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜),靜置5~10分鐘。2.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞,如果細(xì)胞變圓,相互之間不再連接成片,這時(shí)應(yīng)立即在超凈臺(tái)中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細(xì)胞懸液。3.將細(xì)胞懸液吸出2ml左右,加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。一般情況,傳代后的細(xì)胞在2小時(shí)左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,2~4天就可在瓶?jī)?nèi)形成單層,需要再次進(jìn)行傳代。 NCIH2405細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-865細(xì)胞、SHG 44細(xì)胞、143TK-細(xì)胞 H-520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP-1細(xì)胞、UPCI-SCC090細(xì)胞、CPAE細(xì)胞 AR-42J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC4細(xì)胞、RAEC細(xì)胞、RCC_7860細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 MIHA epithelioid cells正常人肝細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng),營(yíng)養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問(wèn)題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過(guò)可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),而且它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小,不易引起注意。國(guó)內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無(wú)膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見(jiàn)的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國(guó)外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無(wú)菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁,一般來(lái)講,對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬(wàn)古霉素等完全不敏感;對(duì)多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對(duì)支原體有較小抑制作用,所以常不用來(lái)作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 Huh7.5.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H716細(xì)胞、MM96L細(xì)胞、LoMeT-ccRcc細(xì)胞 NCIH292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS 683T細(xì)胞、Beta-TC-6細(xì)胞、BRL細(xì)胞 COR-L51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C26細(xì)胞、MC/9細(xì)胞、LM8細(xì)胞 NRK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DC2.4細(xì)胞、Sp2/O-Ag14細(xì)胞、NCTC-3960細(xì)胞 DMS53細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ca-Ski細(xì)胞、L428細(xì)胞、H1836細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 MIHA epithelioid cells正常人肝細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) 細(xì)胞凍存的步驟:1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來(lái)選擇;3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù));4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過(guò)夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過(guò)夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見(jiàn),凍存半年后,取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 130T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 132細(xì)胞、HuPT4細(xì)胞、F81細(xì)胞 MUTZ1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63Ag8細(xì)胞、Human Epithelioma-2細(xì)胞、HITT15細(xì)胞 Intestinal Porcine Epithelial Cell line-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-5細(xì)胞、A-101D細(xì)胞、FCCH1018細(xì)胞 LoVo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 270細(xì)胞、SNU878細(xì)胞、NCI-H1105細(xì)胞 CHO cell clone K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-95細(xì)胞、SKNSH細(xì)胞、HCC9724細(xì)胞 PGLH7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHL-11細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞、OACP4C細(xì)胞 RCC10RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801-95C細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-10A細(xì)胞、MIO-M1細(xì)胞 Capan2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-460細(xì)胞、KMB 17細(xì)胞、DI TNC1細(xì)胞 OCILY10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLF-a細(xì)胞、RSMC細(xì)胞、C3H10T1/2 clone8細(xì)胞 HEL 299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2085細(xì)胞、MM.1S細(xì)胞、L-5178-Y細(xì)胞 MIHA epithelioid cells正常人肝細(xì)胞系 WRL68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-283細(xì)胞、H-2107細(xì)胞、LC-2/ad細(xì)胞 PTK-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC97L細(xì)胞、SUDHL-1細(xì)胞、Ramos (RA 1)細(xì)胞 CBRH7919細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP100細(xì)胞、MDA-PCa-2b細(xì)胞、BT 325細(xì)胞 IHC-ST1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Be-Wo細(xì)胞、H-3255細(xì)胞、HPC-Y5細(xì)胞 PGLH7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHL-11細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞、OACP4C細(xì)胞 RBL 2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2023細(xì)胞、UPCI-SCC-90細(xì)胞、C4-2細(xì)胞 RBL 2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2023細(xì)胞、UPCI-SCC-90細(xì)胞、C4-2細(xì)胞 RBL.2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT20細(xì)胞、HCC 70細(xì)胞、GM346細(xì)胞 SK HEP 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HcaF細(xì)胞、Wien-133細(xì)胞、CAMA-1細(xì)胞 P-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF/CD18細(xì)胞、184A1細(xì)胞、Spodoptera frugiperda clone 9細(xì)胞 PLC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs739T細(xì)胞、RPMI-1788細(xì)胞、OVCA-432細(xì)胞 MSC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CALU1細(xì)胞、GT38細(xì)胞、ARPE-19細(xì)胞 Balb/c3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-SF 21AE細(xì)胞、DLM8細(xì)胞、BL6細(xì)胞 Tu686細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA-RO 81細(xì)胞、SUM102細(xì)胞、RPMI8402細(xì)胞 HCC15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRO81-2細(xì)胞、YD-38細(xì)胞、MOLT.4細(xì)胞 L 363細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI 3B細(xì)胞、MDCK.2細(xì)胞、LU451細(xì)胞 CCRF/CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-1細(xì)胞、PL 5細(xì)胞、DHBE細(xì)胞 SW780細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV-21G細(xì)胞、EB3 [Human Burkitt lymphoma]細(xì)胞、Vero E6細(xì)胞 KATO 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WTRL1細(xì)胞、L929細(xì)胞、HCC1438細(xì)胞 CAKI.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA1細(xì)胞、NKM1細(xì)胞、HGMC細(xì)胞 EL 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178Y細(xì)胞、Hs 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