"RAG epithelioid cells小鼠腎腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:腎癌;BALB/c 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng);細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%;細(xì)胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟:1.將長成的培養(yǎng)細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)液,加入少許消化液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜),靜置5~10分鐘。2.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞,如果細(xì)胞變圓,相互之間不再連接成片,這時(shí)應(yīng)立即在超凈臺中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細(xì)胞懸液。3.將細(xì)胞懸液吸出2ml左右,加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。一般情況,傳代后的細(xì)胞在2小時(shí)左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,2~4天就可在瓶內(nèi)形成單層,需要再次進(jìn)行傳代。 MHCC97L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSADX5細(xì)胞、COLO 741細(xì)胞、CEM-C7細(xì)胞 SKNBE(1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI-Rb 1細(xì)胞、HCC-1588細(xì)胞、NBL_S細(xì)胞 J774A.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D:cl3細(xì)胞、UCLA-SO-14細(xì)胞、U-138-MG細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 RAG epithelioid cells小鼠腎腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對其進(jìn)行檢測,而且它對細(xì)胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 H2126細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMC-HN-8細(xì)胞、NCI-HUT-520細(xì)胞、K562/ADP細(xì)胞 SF767細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780CP70細(xì)胞、TE14細(xì)胞、KE 37細(xì)胞 LS 180細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細(xì)胞、MODE-K細(xì)胞、H-661細(xì)胞 SLMT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 428細(xì)胞、SK-N-F1細(xì)胞、HEC-1-B細(xì)胞 P31-FUJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:801-D細(xì)胞、HCT 15細(xì)胞、SL-29細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 RAG epithelioid cells小鼠腎腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 細(xì)胞凍存的步驟:1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇;3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù));4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 SW-948細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1573細(xì)胞、CL-34細(xì)胞、SKG-3a細(xì)胞 Colon26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ABE8.1/2細(xì)胞、TE 85.T細(xì)胞、BCECs細(xì)胞 B16-F10--RED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3(A31)細(xì)胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細(xì)胞、HO-8910PM細(xì)胞 SK-MEL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D283MED細(xì)胞、MDA-MB231細(xì)胞、PaTu 8988s細(xì)胞 SCC-1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:mREC細(xì)胞、HCC-1500細(xì)胞、Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞 Ca761細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2170細(xì)胞、ST細(xì)胞、PTK 1細(xì)胞 HCA7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAKI1細(xì)胞、H128細(xì)胞、Hs-606-T細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM TK negative細(xì)胞、MDAMB175細(xì)胞、OVCAR 5細(xì)胞 HT55細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 159PT細(xì)胞、UM-UC-14細(xì)胞、ML-2細(xì)胞 NCI-H2029細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ku812細(xì)胞、P30 OHK細(xì)胞、SK-NEP-1細(xì)胞 RAG epithelioid cells小鼠腎腺癌細(xì)胞系 NCI-H1703細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC1sq細(xì)胞、NH-6細(xì)胞、OVCAR3細(xì)胞 YAC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-2細(xì)胞、SUDHL5細(xì)胞、MCA-205細(xì)胞 RAW 264.7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2172細(xì)胞、MFM-223細(xì)胞、SK-GT-4細(xì)胞 SP2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD1095Sk細(xì)胞、SW 13細(xì)胞、HPB-ALL細(xì)胞 253J-Bladder-V細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA 4細(xì)胞、KMST-6細(xì)胞、PAI細(xì)胞 MDA-MB-175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293T/17細(xì)胞、MDA-MB-453細(xì)胞、UCH-1細(xì)胞 Chang Cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Z138細(xì)胞、G-361細(xì)胞、KYSE450細(xì)胞 U-138 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH196細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞、VMRCRCZ細(xì)胞 P3/NS1/1-Ag4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2444細(xì)胞、IR 983F細(xì)胞、LC1細(xì)胞 kms 11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hopkins-92細(xì)胞、293-EBNA1細(xì)胞、H-1155細(xì)胞 SJRH30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMEL細(xì)胞、SKOV3細(xì)胞、WEHI 164 TC細(xì)胞 HEK-293-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LK-2細(xì)胞、Reh細(xì)胞、SHG 44細(xì)胞 G361mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VP 267細(xì)胞、HCC-202細(xì)胞、HPB/ALL細(xì)胞 NCIH727細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-N87細(xì)胞、TN5B14細(xì)胞、SW1573細(xì)胞 C3H-10T1/2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUTZ-3細(xì)胞、ATN1細(xì)胞、Hs 281.T細(xì)胞 H740細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Neuro2a細(xì)胞、SUM-190細(xì)胞、IOSE80細(xì)胞 P1-Raji細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC-10RGB細(xì)胞、MG-HU-3細(xì)胞、OCI-AML-5細(xì)胞 NCIH1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs888Lu細(xì)胞、LLC1細(xì)胞、NCI-H676細(xì)胞 Panc 03.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Scott細(xì)胞、PANC-04-03細(xì)胞、MAVER1細(xì)胞 LS174T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rat Lung-65細(xì)胞、Ra #1細(xì)胞、P3/X63/Ag8細(xì)胞 LS 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