"SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:骨肉瘤;女性 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。 MDA231-LM2-4175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CSQT-2細(xì)胞、Leukemia L1210細(xì)胞、HCT-FET細(xì)胞 QBI-293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G401細(xì)胞、C33-A細(xì)胞、Hs729細(xì)胞 SR-786細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML-4細(xì)胞、EFM-192B細(xì)胞、SK-RC-52細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前,細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細(xì)胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細(xì)胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細(xì)胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞凍存:計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以1×10(7)到5×10(7)細(xì)胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細(xì)胞凍存:使用分離試劑從基層分離細(xì)胞,分離時(shí)盡可能溫和,使對細(xì)胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細(xì)胞,確定有活力細(xì)胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以5×10(6)到1×10(6)細(xì)胞/ml密度,在凍存液中懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 H4-II-E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hmy.2 CIR細(xì)胞、PANC 203細(xì)胞、624細(xì)胞 H-1238細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARH77細(xì)胞、Anip[973]細(xì)胞、THLE-3細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY10細(xì)胞、RCC23細(xì)胞、CRFK細(xì)胞 EA hy 926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00637B細(xì)胞、SUDHL-6細(xì)胞、HS-68細(xì)胞 NCI-HUT-596細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:675T細(xì)胞、A 253細(xì)胞、CWR22Rv1細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 GES1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293FT細(xì)胞、Hs832.Tc細(xì)胞、MG-HU-3細(xì)胞 BJAB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF767細(xì)胞、SkMel31細(xì)胞、Hs739T細(xì)胞 BC-3-H-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP126細(xì)胞、Lewis Lung細(xì)胞、NBL-3細(xì)胞 SW-1271細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa/S3細(xì)胞、HEK293T/17細(xì)胞、DLD 1細(xì)胞 T-47-D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BTI-TN5B1-4細(xì)胞、Panc_08_13細(xì)胞、KMST6細(xì)胞 NCIH2030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoHH-2細(xì)胞、RH-30細(xì)胞、GP2-293細(xì)胞 8305-C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CDC/EU.HMEC-1細(xì)胞、TGHAVSMC細(xì)胞、MCF12F細(xì)胞 HCC202細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKM1細(xì)胞、WEHI 164 TC細(xì)胞、SUDHL16細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW962細(xì)胞、2B4細(xì)胞、KYSE30細(xì)胞 ST細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGF-1細(xì)胞、THPI細(xì)胞、RGM-1細(xì)胞 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細(xì)胞系 Hs729T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIHOVCAR3細(xì)胞、EJ細(xì)胞、MDA361細(xì)胞 NCI.H226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1-B細(xì)胞、5-8F細(xì)胞、NCI H508細(xì)胞 Renal Carcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP subline C4-2細(xì)胞、H9c2細(xì)胞、Hs 888.T細(xì)胞 Pro-Lec1.3C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3 clone A31細(xì)胞、UACC 812細(xì)胞、NCI-H1770細(xì)胞 Rat 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AR4IP細(xì)胞、TEV-1細(xì)胞、253J B-V細(xì)胞 Hs 766T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRVEC細(xì)胞、MDA MB 436細(xì)胞、WM-266-4細(xì)胞 PANC 813細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT GEO細(xì)胞、MESSADX5細(xì)胞、PM6細(xì)胞 QBI-HEK 293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EU-2細(xì)胞、MN9D細(xì)胞、CHAGOK1細(xì)胞 SKO3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:143 B細(xì)胞、NCIH460細(xì)胞、CV-1 in Origin Simian-7細(xì)胞 HDQP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tissue Culture-1細(xì)胞、HuP-T4細(xì)胞、Ect1/E6E7細(xì)胞 Hs-27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNBE2細(xì)胞、NTERA2-D1細(xì)胞、SNU5細(xì)胞 H-2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-PAP細(xì)胞、GTL16細(xì)胞、NCTC 3960細(xì)胞 SBC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-C2A細(xì)胞、KLE細(xì)胞、RD細(xì)胞 Dami細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1954細(xì)胞、SK-NMC細(xì)胞、U-138MG細(xì)胞 RPMI1788細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1436細(xì)胞、UM-UC14細(xì)胞、NCI-H1436細(xì)胞 ECC-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LICR-LON-HN6-R細(xì)胞、Z138細(xì)胞、MDA-MB436細(xì)胞 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