"LLC-MK2 epithelioid cells恒河猴腎細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:胚胎;腎;自發(fā)永生 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開(kāi)。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無(wú)色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見(jiàn),凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 MKN45細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-671細(xì)胞、MCMEC細(xì)胞、SVG(P12)細(xì)胞 YES 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU520細(xì)胞、Factor Dependent Continuous-Paterson 1細(xì)胞、SUM-159細(xì)胞 NCIH1915細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW260細(xì)胞、293細(xì)胞、MDA 435細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 LLC-MK2 epithelioid cells恒河猴腎細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞復(fù)蘇基本方法:1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。3.剪開(kāi)紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺(tái)上打開(kāi)蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。收到T25 flask細(xì)胞時(shí),處理方式為:在寄送過(guò)程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請(qǐng)檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況和有無(wú)污染現(xiàn)象,若有任何問(wèn)題,不要打開(kāi)蓋子,請(qǐng)立即通知細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室。將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞回溫至37°C,并讓運(yùn)送過(guò)程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。隔天后,于無(wú)菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中,或細(xì)胞已長(zhǎng)滿盤,則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 Tu 212細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-187細(xì)胞、769P細(xì)胞、ssMCF7細(xì)胞 H-1793細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECC-10細(xì)胞、Swiss 3T6細(xì)胞、SCC-25細(xì)胞 Rca-B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GT39細(xì)胞、MDA-MB 231細(xì)胞、NCI-H1792細(xì)胞 NBLS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEF細(xì)胞、RT-BM 1細(xì)胞、RK 13細(xì)胞 NCI H747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKL細(xì)胞、HeLa-S3細(xì)胞、Colon 26細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 LLC-MK2 epithelioid cells恒河猴腎細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長(zhǎng),及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等;用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 Jurkat-FHCRC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK-1細(xì)胞、SKLMS1細(xì)胞、H-508細(xì)胞 HOC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIXC-002細(xì)胞、H1092細(xì)胞、OVCA420細(xì)胞 SW954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS81細(xì)胞、MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞、HCC15細(xì)胞 VA-ES-BJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Col-1細(xì)胞、SW480細(xì)胞、H.Ep. No. 2細(xì)胞 PG-BE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1792細(xì)胞、SUPT-1細(xì)胞、H510A細(xì)胞 1.1B4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN-18細(xì)胞、GM637A細(xì)胞、Human Kidney-2細(xì)胞 BC-025細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos G6.C10細(xì)胞、Human Microglia Clone 3細(xì)胞、NCI-H748細(xì)胞 NIH:OVCAR-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63-Ag8.653細(xì)胞、QBI-HEK 293A細(xì)胞、IEC-6細(xì)胞 HOS (TE85, Clone F5)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JurkatE6-1細(xì)胞、HGE細(xì)胞、OCI-Ly03細(xì)胞 HLE-SRA-01/04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc2.03細(xì)胞、CEMC7細(xì)胞、NTera 2細(xì)胞 LLC-MK2 epithelioid cells恒河猴腎細(xì)胞系 HLEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca8113細(xì)胞、AAV293細(xì)胞、DHL5細(xì)胞 MKN28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV112細(xì)胞、D324細(xì)胞、SKLU1細(xì)胞 PL5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PSN-1細(xì)胞、JM-Jurkat細(xì)胞、SK-N-FI細(xì)胞 NCI-H1618細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3396細(xì)胞、H-1417細(xì)胞、SNU-1細(xì)胞 LS-513細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1792細(xì)胞、OCIAML4細(xì)胞、brain-derived Endothelial cells.3細(xì)胞 HCC1569細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC57細(xì)胞、UPCI-SCC-154細(xì)胞、SU86-86細(xì)胞 HCC1569細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC57細(xì)胞、UPCI-SCC-154細(xì)胞、SU86-86細(xì)胞 Los Angeles Prostate Cancer-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF295細(xì)胞、HKBML細(xì)胞、HRVEC細(xì)胞 SKG IIIa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS578T細(xì)胞、NIH:OVCAR-3細(xì)胞、WEHI 3細(xì)胞 MV-522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 102細(xì)胞、451-LU細(xì)胞、Caki2細(xì)胞 Normal fibroblast-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:58F細(xì)胞、PNT1A細(xì)胞、JVM-2細(xì)胞 HSAS4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A 2058細(xì)胞、C8166細(xì)胞、MDA-MB-134VI細(xì)胞 Hs 274細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFPAC-1細(xì)胞、TK-10細(xì)胞、AML 12細(xì)胞 NCIH847細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPM2細(xì)胞、Pa16C細(xì)胞、H23細(xì)胞 CHO-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OPM-2細(xì)胞、NTera2 cl.D1細(xì)胞、KMB17細(xì)胞 EnCa1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K7M2-WT細(xì)胞、CHL-11細(xì)胞、NCI-H2023細(xì)胞 Chang Cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Z138細(xì)胞、G-361細(xì)胞、KYSE450細(xì)胞 ST 486細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCEC-B4G12細(xì)胞、KLN 205細(xì)胞、BMF細(xì)胞 MDAMB468細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT1080細(xì)胞、BC-023細(xì)胞、IM9細(xì)胞 MBT-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEY-A8細(xì)胞、HT-1376細(xì)胞、EC109細(xì)胞 NCI-H196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIE-115細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-12T細(xì)胞、L615細(xì)胞 UCLA NPA-87-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-16細(xì)胞、MHCC97-L細(xì)胞、HCC78細(xì)胞 HVSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML5細(xì)胞、1.1B4細(xì)胞、BLO 11細(xì)胞 Oregon J-111細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC6細(xì)胞、hTERT-HME1細(xì)胞、ARIP細(xì)胞 NMC-G1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MB157細(xì)胞、HLCL9B10細(xì)胞、PanC1細(xì)胞 Sp2/O-Ag14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUVEC細(xì)胞、SJ-RH30細(xì)胞、H-87細(xì)胞 Hs695T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rat Basophilic Leukemia-1細(xì)胞、COLO320/DM細(xì)胞、SUPM2細(xì)胞 PC.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-NM-C細(xì)胞、AZ 521細(xì)胞、SK-NM-C細(xì)胞 OCI-AML3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0078細(xì)胞、UPCI:SCC90細(xì)胞、P3X63Ag8.653細(xì)胞 PANC3.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT-B細(xì)胞、AU 565細(xì)胞、SNGM細(xì)胞 Clone 166細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-33Co細(xì)胞、COLO 320F細(xì)胞、SV40 MES 13細(xì)胞 WM 239-A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCP1細(xì)胞、H-2106細(xì)胞、TE353.SK細(xì)胞 RKO-AS45-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0827細(xì)胞、MDA-MB-468-RED細(xì)胞、OCI Ly19細(xì)胞 NOK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞、RPMI 1846細(xì)胞、DoHH2細(xì)胞 GM2131細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT-112細(xì)胞、P3-X63-Ag8-6-5-3細(xì)胞、PIEC細(xì)胞 SHIN-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ball 1細(xì)胞、N2a細(xì)胞、HTR8細(xì)胞 SRA01/04 (HLE)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMO-1細(xì)胞、SBC3細(xì)胞、3-LL細(xì)胞 Hs274T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1437細(xì)胞、CAOV3細(xì)胞、PC-9/S1細(xì)胞 SKMEL-31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOMO1細(xì)胞、EST81細(xì)胞、b.End3細(xì)胞 HCC366細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-363細(xì)胞、KYSE70細(xì)胞、GM00637H細(xì)胞 NIH:OVCAR-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPTEC TERT1細(xì)胞、HONE-1細(xì)胞、MDA MB 175 VII細(xì)胞 KU.812細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-774A.1細(xì)胞、Hi-five細(xì)胞、HEK-293-H細(xì)胞 Panc5.04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs281T細(xì)胞、H2342細(xì)胞、TOV21細(xì)胞 NCI-H2591細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML 12細(xì)胞、MC38細(xì)胞、Tu 212細(xì)胞 RBL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS79細(xì)胞、NIH-OVCAR-3細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞 HGE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs343T細(xì)胞、ECGI10細(xì)胞、A-2058細(xì)胞 SKMEL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-20細(xì)胞、GC-2spd(ts)細(xì)胞、BAC1.2F5細(xì)胞 HSC-T6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs742T細(xì)胞、MM6細(xì)胞、HOC-1細(xì)胞 RS(4;11)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University Pediatric T-cell line 1細(xì)胞、MUTZ1細(xì)胞、THLE2細(xì)胞 A431細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS688AT細(xì)胞、H740細(xì)胞、HCC 94細(xì)胞 FHCRC-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Metastatic Variant-522細(xì)胞、SupT1細(xì)胞、NCI-H2227細(xì)胞 LLC-MK2 epithelioid cells恒河猴腎細(xì)胞系 PanC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TB1 Lu細(xì)胞、OLN-93細(xì)胞、M-20細(xì)胞 U-118 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DH82細(xì)胞、BT 20細(xì)胞、HEK/EBNA細(xì)胞 X63Ag8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144mel細(xì)胞、KU-812-F細(xì)胞、NCIH596細(xì)胞 SW954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS81細(xì)胞、NK 10a細(xì)胞、Tca-8113細(xì)胞 "
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