細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)
中文名稱:細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)
英文名稱:Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
Annexin V-Alexa Fluor488/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor488標(biāo)記了的Annexin V作為探針,來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生,可用流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。 其檢測原理為:在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細(xì)胞中,PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合。可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。 另外,本試劑盒中還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。PI是一種核酸染料,它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但可以透過凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此,將Annexin V與PI聯(lián)合使用時(shí),PI 則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被Alexa Fluor488 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)。 試劑盒組份: Annexin V-Alexa Fluor488————————100 μl PI Staining Solution (20 μg/ml)————200 μl 4×Binding Buffer————————————4 ml 注意事項(xiàng) 1) 由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速的過程,建議樣品在染色后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。 2) 對于貼壁細(xì)胞,消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷,PI攝入過多;消化時(shí)間過長,細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-Alexa Fluor488的結(jié)合。消化時(shí)將胰酶鋪滿孔板底后,輕搖時(shí)胰酶與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段時(shí)間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。 3) 如果樣品來源于血液,請務(wù)必除去血液中的血小板。因?yàn)檠“搴蠵S,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。 4) 試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。 5) Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。 儲存條件:4℃,有效期一年。
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