"HOS epithelioid cells人骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 A-172MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLEpiC細(xì)胞、SKG IIIa細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-361細(xì)胞 Jurkat-FHCRC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK-1細(xì)胞、SKLMS1細(xì)胞、H-508細(xì)胞 SUPT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN14B細(xì)胞、Hs852T細(xì)胞、Cates 1B細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 HOS epithelioid cells人骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞復(fù)蘇基本方法:1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。收到T25 flask細(xì)胞時,處理方式為:在寄送過程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細(xì)胞實驗室。將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞回溫至37°C,并讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中,或細(xì)胞已長滿盤,則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代;每周換液2-3次。 R3/1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JS1細(xì)胞、NK-10A細(xì)胞、HSC2細(xì)胞 HNTEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-SA細(xì)胞、NRK clone 52E細(xì)胞、MCM細(xì)胞 FRO81-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN-m細(xì)胞、SW1088細(xì)胞、NCI-H196細(xì)胞 CoC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D324細(xì)胞、L540細(xì)胞、74Int細(xì)胞 RPMI 7951細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63.Ag8.653細(xì)胞、BEAS 2B細(xì)胞、SU-DHL-4細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 HOS epithelioid cells人骨肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞的混合樣 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細(xì)胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細(xì)胞的實驗穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 NCIN87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1876細(xì)胞、NCIH841細(xì)胞、NCI-H2405細(xì)胞 Hi-five細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTh-74細(xì)胞、CAL851細(xì)胞、NCIH211細(xì)胞 HEC251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1-0細(xì)胞、IHH4細(xì)胞、MDA453細(xì)胞 SW1116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE0520細(xì)胞、HT-1197細(xì)胞、NCI-H719細(xì)胞 HEK/EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K 562細(xì)胞、HT3細(xì)胞、NCI-H1693細(xì)胞 M059J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Reuber-H-35 hepatoma細(xì)胞、RPE D407細(xì)胞、CFSC-8B細(xì)胞 NCIH1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUP-T1細(xì)胞、E.L.4細(xì)胞、Panc 2.03細(xì)胞 HEK 293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ESC-410細(xì)胞、LC-1/sq細(xì)胞、RGC5細(xì)胞 WSU-HN13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 8402細(xì)胞、H2073細(xì)胞、DAN-G細(xì)胞 HS578細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAMA-1細(xì)胞、SCCVII/St細(xì)胞、MT-3 [Human leukocytes]細(xì)胞 HOS epithelioid cells人骨肉瘤細(xì)胞系 NCIN87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1876細(xì)胞、NCIH841細(xì)胞、NCI-H2405細(xì)胞 BEL 7405細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H128細(xì)胞、D-341細(xì)胞、IOSE80UBC細(xì)胞 KU19-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEPa2細(xì)胞、GalK1細(xì)胞、PLB-985細(xì)胞 NCI-H250細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-295細(xì)胞、H1341細(xì)胞、NCI-H226細(xì)胞 OAW42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EAC細(xì)胞、M210B4細(xì)胞、MDA-MB-175-VII細(xì)胞 NCIH1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs888Lu細(xì)胞、LLC1細(xì)胞、NCI-H676細(xì)胞 NCIH1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs888Lu細(xì)胞、LLC1細(xì)胞、NCI-H676細(xì)胞 KYSE 50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa S3細(xì)胞、HM1900細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞 TE671細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU-Mel細(xì)胞、SK.MEL.28細(xì)胞、Y3.AG.1.2.3細(xì)胞 PLC-8024細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1-6細(xì)胞、BT-B細(xì)胞、AMC-HN8細(xì)胞 TCam-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMES-1細(xì)胞、NB-9細(xì)胞、HFF細(xì)胞 SUM-159細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1341細(xì)胞、HS5細(xì)胞、JurkatE6-1細(xì)胞 PBMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:kms 11細(xì)胞、LLC-MK-2細(xì)胞、526-mel細(xì)胞 KU 812細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A9 (Hamprecht)細(xì)胞、SK-MEL-28細(xì)胞、SKUT-1細(xì)胞 MMAc-Serum Free細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly18細(xì)胞、TE-4細(xì)胞、KTCTL140細(xì)胞 MDBK (NBL-1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H378細(xì)胞、RIN-m細(xì)胞、COR-L23/P細(xì)胞 Giant Cell Tumor細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L- cell細(xì)胞、NCI-H69細(xì)胞、E.L.4細(xì)胞 OCM-1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A.704細(xì)胞、Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞、OCILY3細(xì)胞 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