"L6 epithelioid cells大鼠骨骼肌成肌細胞系 細胞背景資料:該細胞是Yaffe在甲基膽蒽存在的情況下從大鼠大腿肌原代培養(yǎng)的最初兩代細胞中分離得到的;在培養(yǎng)基中融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維,細胞融合的程度隨著代數的增加而下降,因此細胞應低代次冷凍并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。鼠痘病毒陰性。該細胞應在達匯合狀態(tài)前傳代,以延緩細胞分化能力的喪失。 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 BALB/3T3 (clone A31)細胞系相關產品:OVCAR5細胞、MUTZ3細胞、BNL CL2細胞 U87 MG細胞系相關產品:F56 [Human neoplasm]細胞、Chinese Hamster Lung細胞、NCI-H929細胞 SKNBE(2c)細胞系相關產品:Melan-a細胞、HCA 7細胞、NCI-H522細胞 細胞生長:貼壁 L6 epithelioid cells大鼠骨骼肌成肌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室,的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要?,F簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止狀態(tài),故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內,水晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。凍存細胞的復蘇:凍存細胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細胞。1ml凍存細胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進行活細胞計數,細胞接種應該至少在3×10(5)活細胞/ml;培養(yǎng)細胞12到24小時,更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細胞,并且進行活細胞計數。細胞鋪板,細胞接種應該至少為3×10(5)活細胞/ml。細胞的分化:一個成年人全身細胞總數約1012個,可以區(qū)分為200多種不同類型的細胞:形態(tài)結構,代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細胞均來自一個受精卵細胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細胞后代在形態(tài)、結構和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化。細胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細胞的產生和分化,這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細胞,轉入分化,通常從細胞周期中G1期開始時一個確定的點G0點“逃逸”出細胞周期。旺盛生長分裂的細胞和各種分化了的細胞,它們的基因表達和代謝活動各不相同。 細胞傳代方法:1:2傳代 Cloudman S91 melanoma細胞系相關產品:COLO 206細胞、CAL39細胞、NCI-522細胞 SF126細胞系相關產品:KMH-2細胞、MCA 205細胞、MKN 7細胞 Factor Dependent Cell-Paterson 1細胞系相關產品:HeLa S-3細胞、RPMI-8402細胞、G-Olig2細胞 OVCAR 4細胞系相關產品:TSCC1細胞、HIEC細胞、NPA-87細胞 FRhK-4細胞系相關產品:IEC-18細胞、EA hy 926細胞、WEHI-164細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系 L6 epithelioid cells大鼠骨骼肌成肌細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:成肌細胞樣 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當地溫度,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 KU 812F細胞系相關產品:RPMI-8226S細胞、MRC-9細胞、HCC1171細胞 1.1B4細胞系相關產品:LN-18細胞、GM637A細胞、Human Kidney-2細胞 Hep 2細胞系相關產品:RA細胞、HEK 293FT細胞、HOSEpiC細胞 MB 157細胞系相關產品:UPCI:SCC090細胞、Z-138細胞、Hepatoma 22細胞 GC-1spg細胞系相關產品:SK.MEL.2細胞、NCI-H1299細胞、YES 2細胞 CMT64細胞系相關產品:LN382細胞、Ramos(RA1)細胞、LMH細胞 NCI-H2342細胞系相關產品:174xCEM.T2細胞、NCIH889細胞、hEEC細胞 RPMI8402細胞系相關產品:C-33 A細胞、MDCC MSB1細胞、Rat 1細胞 DV-90細胞系相關產品:Eca-109細胞、Wayne State University-Head and Neck 13細胞、Duck embryo細胞 HCC-1359細胞系相關產品:SUM-159PT細胞、NIH:OVCAR-4細胞、Karpas-299細胞 L6 epithelioid cells大鼠骨骼肌成肌細胞系 451-LU細胞系相關產品:U-138 MG細胞、LY-R細胞、HOP92細胞 NCI-460細胞系相關產品:CAL12T細胞、GFP-Olig2細胞、MKN-7細胞 H2342細胞系相關產品:HGE細胞、3AA細胞、MC 3T3-E1細胞 CEMO-1細胞系相關產品:HCC-1395細胞、MADB 106細胞、NUGC-3細胞 ABC1細胞系相關產品:Hs-852-T細胞、Sci-1細胞、R1800[RA]細胞 KMS26細胞系相關產品:Kuramochi細胞、NCI-441細胞、3T3 Swiss Albino細胞 GA10細胞系相關產品:H-322細胞、HCT116/L細胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細胞 HCC-1395細胞系相關產品:SCaBER細胞、MOLP8細胞、HO1-N1細胞 Immortalized Human Hepatocytes細胞系相關產品:H-7721細胞、H-774細胞、CaES-17細胞 EJ-1細胞系相關產品:Functional Liver Cell-7細胞、FHCRC subclone 11細胞、Cor L88細胞 OVCAR-3細胞系相關產品:TE10細胞、SW1417細胞、LN-382細胞 MPC 11細胞系相關產品:KLE細胞、H1105細胞、SEG-1細胞 Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞系相關產品:U251細胞、SNU1040細胞、MLFC細胞 AX-Mel細胞系相關產品:TCMK-1細胞、OCUM-1細胞、AE 1201細胞 H660細胞系相關產品:TE5細胞、MC3T3-E1(C4)細胞、UPCI-SCC-90細胞 LICR-LON-HN6-R細胞系相關產品:751細胞、VM-CUB-1細胞、IGR.OV1細胞 CL-40細胞系相關產品:HNE-3細胞、HIBEC細胞、NG108-15細胞 BHK21細胞系相關產品:MHCC97細胞、H2135細胞、SU 86.86細胞 Hs 683細胞系相關產品:RDES細胞、Hs606細胞、HuH-6細胞 SKNSH細胞系相關產品:OVCAR 432細胞、Pfeiffer細胞、AR41P細胞 ST486細胞系相關產品:GalK1細胞、BNCL-2細胞、CHP100細胞 IPLB-SF-21-AE細胞系相關產品:SKMEL24細胞、SCC154細胞、JC細胞 SKGT4細胞系相關產品:BEND細胞、HCC15細胞、CCRF SB細胞 L5178-R細胞系相關產品:Karpas-299細胞、GM3190細胞、P3X63-Ag8.653細胞 NK 10a細胞系相關產品:NCIH1734細胞、alpha TC1.6細胞、MPP-89細胞 HFT-8810細胞系相關產品:NCI-H1155細胞、TJ905細胞、Capan2細胞 H1105細胞系相關產品:CHP 126細胞、SW579細胞、D-324MED細胞 H1770細胞系相關產品:H-209細胞、HuH1細胞、Ku812細胞 PMVEC細胞系相關產品:BC3H1細胞、FM-88細胞、RMS1598細胞 GP293細胞系相關產品:KU 812細胞、CL-11細胞、BMSC/hBMSCs細胞 H-596細胞系相關產品:H-661細胞、CAL62細胞、Tb1Lu細胞 HCC0366細胞系相關產品:MCF/Adr細胞、RN-c細胞、NTC200細胞 LM(TK-)細胞系相關產品:HCC0015細胞、373 MG細胞、B/C3T3細胞 TE8細胞系相關產品:RASMC細胞、NKM-1細胞、PLA-801D細胞 Psi-2-DAP細胞系相關產品:EAC-E2G8細胞、IEC-6細胞、OKa-C-1細胞 NCI747細胞系相關產品:N87細胞、KYSE0520細胞、NCI-H735細胞 HCC-1187細胞系相關產品:High 5細胞、Wistar Institute-38細胞、OCI-Ly8細胞 JHH2細胞系相關產品:DMS 153細胞、KCL22細胞、675T細胞 CCF-STTG1細胞系相關產品:MT-2J細胞、ME 180細胞、NCI-H1184細胞 Reh細胞系相關產品:CA922細胞、BT-474細胞、FHs74 Int細胞 Hep G2-Luc細胞系相關產品:SUDHL-5細胞、A673細胞、Ls-174-T細胞 mRMEC細胞系相關產品:A375mel細胞、SCL-II細胞、SK-GT-2細胞 Duke University 4475細胞系相關產品:SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞 CL1.0細胞系相關產品:COR-L 105細胞、M14-MEL細胞、MMAc-Serum Free細胞 NCI-SNU-620細胞系相關產品:NCI-441細胞、MKN 28細胞、MHCC97-L細胞 TEV-1細胞系相關產品:4175細胞、Pan02細胞、Normal fibroblast-10細胞 HEK-EBNA細胞系相關產品:SK-ES細胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436細胞 CCD 966 SK細胞系相關產品:A2780 CP70細胞、149PT細胞、BE2-C細胞 Pa14C細胞系相關產品:DLD 1細胞、HL7702細胞、RPMI no. 8226細胞 Hs-343-T細胞系相關產品:FL83B細胞、RCK-8細胞、HCT FET細胞 alpha TC1.6細胞系相關產品:HO1N1細胞、MIN-6細胞、BC-024細胞 L6 epithelioid cells大鼠骨骼肌成肌細胞系 HCT-15細胞系相關產品:HEK293E細胞、J-82細胞、U373 MG細胞 MLMA細胞系相關產品:NCI-H727細胞、UPCI:SCC090細胞、H-1437細胞 Toledo細胞系相關產品:G-361細胞、Hs739T細胞、KP-N-RT-BM細胞 Henrietta Lacks cells細胞系相關產品:IM 9細胞、U 937細胞、ECV細胞 "
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