"PC-3 epithelioid cells人前列腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:PC-3源于一位62歲白人男性IV級(jí)前列腺腺癌患者的骨轉(zhuǎn)移灶;有低水平的酸性酶活性和5-α-睪酮還原酶活性。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見(jiàn)得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 Rat1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS-1細(xì)胞、HPaSteC(HPSC)細(xì)胞、SW 780細(xì)胞 ZYM-DIEC02細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPaSteC(HPSC)細(xì)胞、RPPVEC細(xì)胞、NL20SV細(xì)胞 SW-1783細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRhK4細(xì)胞、CHOK1細(xì)胞、U14細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 PC-3 epithelioid cells人前列腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長(zhǎng),用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來(lái),很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長(zhǎng)得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長(zhǎng)得滿滿的了。想請(qǐng)教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來(lái)也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒(méi)有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動(dòng)培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動(dòng)作輕,避免晃動(dòng)。細(xì)胞生長(zhǎng)挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問(wèn)題我覺(jué)得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng):二、細(xì)胞細(xì)化太過(guò),細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒(méi)有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來(lái)的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:消化3-5分鐘,1:2,3天內(nèi)可長(zhǎng)滿 HS 1.Tes細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCFs細(xì)胞、NCI-747細(xì)胞、NCI-H-69細(xì)胞 VMRC-RCZ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-839細(xì)胞、H-358細(xì)胞、Panc02.03細(xì)胞 293 F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Huh-7.5.1細(xì)胞、RS4-11細(xì)胞、U87細(xì)胞 VK2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COR-L26細(xì)胞、H2170細(xì)胞、H2171細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NHEK細(xì)胞、T-HEECs細(xì)胞、SV40-MES13細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 PC-3 epithelioid cells人前列腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng),在軟瓊脂中成簇生長(zhǎng),并可懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 KYSE 30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3HR1細(xì)胞、EA.Hy926細(xì)胞、PCI-04B細(xì)胞 KMH2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNBE(2)細(xì)胞、ARIP細(xì)胞、PG-4 (S+L-)細(xì)胞 ONS76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCam 2細(xì)胞、He-La細(xì)胞、MG63細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Huh7.5細(xì)胞、SW 780細(xì)胞、ST2細(xì)胞 SHG 44細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HD-LM-2細(xì)胞、Hs840T細(xì)胞、RT4-D6P2T細(xì)胞 Hs895.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BMU-S1細(xì)胞、D10細(xì)胞、H1395細(xì)胞 RSC-364細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-128細(xì)胞、KMBC細(xì)胞、MES-SA細(xì)胞 HCC1599細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARO 81-1細(xì)胞、ChaGo-K-1細(xì)胞、HCC95細(xì)胞 SNU-354細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK RC 20細(xì)胞、Ketr-3細(xì)胞、NCTC-1469細(xì)胞 LM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFS 60細(xì)胞、NCI-H735細(xì)胞、P30-OHKUBO細(xì)胞 PC-3 epithelioid cells人前列腺癌細(xì)胞系 EOC 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE(1)n細(xì)胞、HRMC細(xì)胞、CORL23細(xì)胞 NBLS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEF細(xì)胞、RT-BM 1細(xì)胞、RK 13細(xì)胞 HS 683T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H522細(xì)胞、U266細(xì)胞、3T3-Swiss細(xì)胞 EAhy926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs.27細(xì)胞、C-33 A細(xì)胞、NCI-322細(xì)胞 SUP-M2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1271細(xì)胞、D283MED細(xì)胞、Baby Hamster Kidney-21細(xì)胞 SK-MEL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU638細(xì)胞、Mouse Bladder Tumor line-2細(xì)胞、CCD 841 CoN細(xì)胞 RBL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MMAc.SF細(xì)胞、NK92MI細(xì)胞、H747細(xì)胞 P388-D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL-I細(xì)胞、SU8686細(xì)胞、CoCL3細(xì)胞 MADB-106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG/HOS Clone F-5細(xì)胞、MUTZ-1細(xì)胞、Caov-3細(xì)胞 IMCD3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P560細(xì)胞、MKN-1細(xì)胞、NCI-H2052細(xì)胞 SUP-B15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-92.05細(xì)胞、PC-3M 2B4細(xì)胞、Hs 742.T細(xì)胞 NCI-SNU-601細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U87 MG細(xì)胞、NIH3T3-L1細(xì)胞、H2591細(xì)胞 H548細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat, Clone E6-1細(xì)胞、CCD18Co細(xì)胞、TSCCa細(xì)胞 HCV 29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly19細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細(xì)胞、OSRC2細(xì)胞 OCI-AML4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-94細(xì)胞、F36P細(xì)胞、Colo320細(xì)胞 KYSE-510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR432細(xì)胞、KE37細(xì)胞、B78細(xì)胞 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chondrocytes細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178YR細(xì)胞、S37細(xì)胞、P3JHR1細(xì)胞 H-1770細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC 96細(xì)胞、Fetal Human Lens-124細(xì)胞、PLC/PRF/5細(xì)胞 Scott and White No. 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H735細(xì)胞、MCF-7ADR細(xì)胞、NCIH740細(xì)胞 WM 239-A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCP1細(xì)胞、H-2106細(xì)胞、TE353.SK細(xì)胞 NCI-H2444細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC-5細(xì)胞、NCI-H2009細(xì)胞、KPL4細(xì)胞 OCI-LY-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ROS17/2.8細(xì)胞、MCA38細(xì)胞、HCC-9724細(xì)胞 MDA-kb2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-699細(xì)胞、ketr 3細(xì)胞、P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞 RTMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PL 45細(xì)胞、J-111細(xì)胞、KMH-2細(xì)胞 SNU668細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Malme-3M細(xì)胞、H-446細(xì)胞、DU 4475細(xì)胞 PC-3 epithelioid cells人前列腺癌細(xì)胞系 H460細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas 299細(xì)胞、87MG細(xì)胞、MA 104細(xì)胞 GP5d細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKES-1細(xì)胞、GLRK 13細(xì)胞、VeroC1008細(xì)胞 PC-9S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK 10細(xì)胞、3T6 Swiss Albino細(xì)胞、COLO-741細(xì)胞 ONS76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCam 2細(xì)胞、FF-WT-BJ細(xì)胞、PANC0403細(xì)胞 "
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