"PG-BE1 Cell:人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:肺巨細(xì)胞癌 EC109細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ra No. 1細(xì)胞、Institute for Medical Research-90細(xì)胞、COLO678細(xì)胞 OCI-Ly8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL5細(xì)胞、LCMS細(xì)胞、NCI-H69細(xì)胞 GT38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOG細(xì)胞、CoCL3細(xì)胞、Mv 1 Lu細(xì)胞 Hep-G2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Emory University-2細(xì)胞、FK81細(xì)胞、CCC-HSF-1細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 PG-BE1 Cell:人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時(shí)間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長接觸抑制的特性,也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長,及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SCL-II細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C41細(xì)胞、LL/2(LLc1)細(xì)胞、CCFSTTG1細(xì)胞 B16 BL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOSC2細(xì)胞、HeLa/S3細(xì)胞、Jurkat-77細(xì)胞 RBE4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B95-8細(xì)胞、MCF-12F細(xì)胞、NCIH522細(xì)胞 SGC-7901/DDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-841CoTr細(xì)胞、DHL5細(xì)胞、LLCPK1細(xì)胞 GS9L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mouse INsulinoma 6細(xì)胞、RAMOS2G64C10細(xì)胞、RGE細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁 PG-BE1 Cell:人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 Mel RM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFC細(xì)胞、HEK-293-F細(xì)胞、H2135細(xì)胞 BEND細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJ-Rh 30細(xì)胞、HBMEC細(xì)胞、MOLP-2細(xì)胞 D407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH:OVCAR-3細(xì)胞、IB-RS-2細(xì)胞、Panc5.04細(xì)胞 HME-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACT-1細(xì)胞、GM02219C細(xì)胞、MIHA細(xì)胞 OVMANA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL-5細(xì)胞、LIXC-002細(xì)胞、PA317細(xì)胞 SKMEL24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D clone 3細(xì)胞、UMNSAH/DF-1細(xì)胞、RGC6細(xì)胞 MPP89細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HNEpC細(xì)胞、MBdSMC細(xì)胞、KS-SLK細(xì)胞 PG-BE1 Cell:人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 RT-112細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C32-mel細(xì)胞、HeLa/DDP細(xì)胞、RCC10細(xì)胞 Dami細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1954細(xì)胞、SK-NMC細(xì)胞、U-138MG細(xì)胞 NCI-H-128細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 8226/S細(xì)胞、NRK-49F細(xì)胞、C-127細(xì)胞 INS-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BALL1細(xì)胞、22Rv1細(xì)胞、COLO 206細(xì)胞 CAKI 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-6666細(xì)胞、BNL 1MEA.7R.1細(xì)胞、CHL/IU細(xì)胞 P3-X63Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC 2185細(xì)胞、Reuber H35細(xì)胞、H460細(xì)胞 EM3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WISH細(xì)胞、BRL3A細(xì)胞、Mino細(xì)胞 NS1/1-Ag4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JEG-3細(xì)胞、SW 839細(xì)胞、MCF-7ADR細(xì)胞 Huh7.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs819.T細(xì)胞、L-WRN細(xì)胞、Mono Mac6細(xì)胞 Huh7.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs819.T細(xì)胞、L-WRN細(xì)胞、Mono Mac6細(xì)胞 EC-109細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRIF細(xì)胞、P3-X63Ag8.653細(xì)胞、SUDHL-1細(xì)胞 OVCAR 8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF-CEM/S細(xì)胞、Ball 1細(xì)胞、JIMT細(xì)胞 FU-MMT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1a細(xì)胞、H-522細(xì)胞、SK-Mel 2細(xì)胞 CBRH-7919細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MH-S細(xì)胞、J774A.1細(xì)胞、BT20細(xì)胞 RT-BM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUC-1細(xì)胞、HCC1806細(xì)胞、GM 2132細(xì)胞 R1800[RA]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFM-192A細(xì)胞、NCI H716細(xì)胞、NCI-SNU-398細(xì)胞 LS1034細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK-52E細(xì)胞、NCL-H548細(xì)胞、SK-N-F1細(xì)胞 H2106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIMEC細(xì)胞、SW 403細(xì)胞、RCC-10RGB細(xì)胞 BL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL62細(xì)胞、Hs729細(xì)胞、HemECs細(xì)胞 Keio University-19-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF539細(xì)胞、RPMI no 8226細(xì)胞、IHH-4細(xì)胞 IOSE-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-a-2細(xì)胞、SNU-C2B細(xì)胞、MAntle cell VERona-1細(xì)胞 FET細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLL-2細(xì)胞、N-Tera-2細(xì)胞、H-1563細(xì)胞 HNE-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOPN-8細(xì)胞、CL1.0細(xì)胞、Hepa 1-6細(xì)胞 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