"L-132 Cell:人胚胎肺上皮細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:胚肺;女性 MDA-kb2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-699細(xì)胞、ketr 3細(xì)胞、P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞 JC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H157細(xì)胞、THEECs細(xì)胞、MDCKII-WT細(xì)胞 SCCVII/St細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-327細(xì)胞、LNCaP-ATCC細(xì)胞、LS 180細(xì)胞 PL11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BHK細(xì)胞、Madin Darby Canine Kidney細(xì)胞、PF-382細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 L-132 Cell:人胚胎肺上皮細(xì)胞系 細(xì)胞傳代時(shí)消化的問(wèn)題:可以這樣說(shuō),對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開(kāi)始的幾代長(zhǎng)的還挺好的,可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞,狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題,可以非??隙ǖ卣f(shuō),你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長(zhǎng)越差。在消化的過(guò)程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是,細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的,每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒(méi)有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。我后來(lái)對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教呵呵。我稱(chēng)之為“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類(lèi)盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來(lái)。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過(guò)的細(xì)胞對(duì)比觀察看誰(shuí)長(zhǎng)的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤(rùn)洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開(kāi)始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對(duì)比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來(lái)的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨(dú)立開(kāi)來(lái)的時(shí)候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實(shí)際情況你自己把握)。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步,對(duì)于特別難消化的細(xì)胞和對(duì)胰酶特別敏感的細(xì)胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒(méi)辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷降到最低,保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了,如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒(méi)必要第三步第四步了。這個(gè)是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會(huì)的。建議你接受一個(gè)新細(xì)胞時(shí)把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來(lái)做比較,去摸索好細(xì)胞對(duì)胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。將細(xì)胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷之外,還有一個(gè)更重要的作用就是,可以程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài),不成片不連體。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)中一些問(wèn)題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過(guò)20%,因?yàn)楹窟^(guò)低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過(guò)高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購(gòu)買(mǎi)的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 ECV細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S91細(xì)胞、NCIH522細(xì)胞、H1954細(xì)胞 RBL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS79細(xì)胞、NIH-OVCAR-3細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞 RT-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRFCEM細(xì)胞、HPDE6c7細(xì)胞、ASH-3細(xì)胞 Y3-Ag1,2,3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO-8910細(xì)胞、CD18/HPAF細(xì)胞、LLC-MK2細(xì)胞 Kasumi 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Nb2-11細(xì)胞、PC.3細(xì)胞、SK_N_FI細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 L-132 Cell:人胚胎肺上皮細(xì)胞系 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來(lái)要注意什么問(wèn)題呢?沒(méi)錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來(lái)復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開(kāi)始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類(lèi)型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類(lèi)型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類(lèi)型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^(guò)1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒(méi)有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問(wèn)題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過(guò)這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說(shuō),人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) H1522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Swiss 3T3細(xì)胞、AML193細(xì)胞、CTLA4Ig-24細(xì)胞 C4-2 B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AR41P細(xì)胞、EB-3細(xì)胞、Panc-813細(xì)胞 ID8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPI-2I細(xì)胞、RA 1細(xì)胞、FHs 74 Int細(xì)胞 HuTu 80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT483細(xì)胞、MPC-83細(xì)胞、Nakata-1細(xì)胞 LAN1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCE細(xì)胞、SKG-IIIa細(xì)胞、Mac-1細(xì)胞 B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMMC7721細(xì)胞、NCI-HUT-460細(xì)胞、LSC-1細(xì)胞 MKN7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 1細(xì)胞、HS-445細(xì)胞、WM266mel細(xì)胞 L-132 Cell:人胚胎肺上皮細(xì)胞系 IHH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS5細(xì)胞、Jurkat-E6細(xì)胞、LPC-H12細(xì)胞 B6Tert-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-0細(xì)胞、EL4細(xì)胞、SNT8細(xì)胞 COV 504細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGBEC細(xì)胞、NCI-H520細(xì)胞、L-132細(xì)胞 MCF 7B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-111細(xì)胞、CCD 1112SK細(xì)胞、Hep 2細(xì)胞 LUDLU1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY3細(xì)胞、CT-26 WT細(xì)胞、K562細(xì)胞 C2-C12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細(xì)胞、WEHI3細(xì)胞、KYSE-450細(xì)胞 Hs683細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293-F細(xì)胞、LK 2細(xì)胞、Line 697細(xì)胞 KU 812F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-8226S細(xì)胞、MRC-9細(xì)胞、HCC1171細(xì)胞 BMF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK10細(xì)胞、SW 1990細(xì)胞、N9細(xì)胞 BMF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK10細(xì)胞、SW 1990細(xì)胞、N9細(xì)胞 RPMI 2650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT細(xì)胞、HuLEC-5a細(xì)胞、H-735細(xì)胞 M 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D.cl3細(xì)胞、NCIH187細(xì)胞、639 V細(xì)胞 CHO Lec1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco-2/BBe細(xì)胞、Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細(xì)胞、A375S2細(xì)胞 2B4-L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNF1細(xì)胞、Hs 343.T細(xì)胞、GM04680細(xì)胞 HMC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ML-2細(xì)胞、NCI-H711細(xì)胞、H35 Reuber細(xì)胞 Caco-2/BBe細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TB-1 Lu細(xì)胞、NB4細(xì)胞、TE 671細(xì)胞 TF-1a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas299細(xì)胞、KYSE-140細(xì)胞、S37細(xì)胞 T98細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPB-15細(xì)胞、CF PAC-1細(xì)胞、MV-4-11細(xì)胞 Panc813細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero-E6細(xì)胞、HPB-ALL細(xì)胞、SuDHL 2細(xì)胞 NCI-H295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-LY-8細(xì)胞、MIA-PaCa-2細(xì)胞、NCI-H1954細(xì)胞 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