"A-431 Cell:人皮膚鱗癌細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞源自一位患有皮膚鱗狀細(xì)胞癌的８５歲女性，是GiardDJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。該細(xì)胞在免疫抑制小鼠體內(nèi)可成瘤，在瓊脂上培養(yǎng)可形成克隆；是一個(gè)超三倍體人細(xì)胞株。
GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞
SF767細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2780CP70細(xì)胞、TE14細(xì)胞、KE 37細(xì)胞
NPC-TW039細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Madison lung細(xì)胞、HCC-1954細(xì)胞、Ramos (RA)細(xì)胞
PLC-PRF-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH345細(xì)胞、DU 4475細(xì)胞、207細(xì)胞
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細(xì)胞系
細(xì)胞傳代時(shí)消化的問(wèn)題：可以這樣說(shuō)，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開(kāi)始的幾代長(zhǎng)的還挺好的，可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞，狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，可以非常肯定地說(shuō)，你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長(zhǎng)越差。在消化的過(guò)程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒(méi)有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。我后來(lái)對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細(xì)胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來(lái)。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過(guò)的細(xì)胞對(duì)比觀察看誰(shuí)長(zhǎng)的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤(rùn)洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開(kāi)始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對(duì)比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來(lái)的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開(kāi)來(lái)的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實(shí)際情況你自己把握）。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步，對(duì)于特別難消化的細(xì)胞和對(duì)胰酶特別敏感的細(xì)胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒(méi)辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷降到最低，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了，如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒(méi)必要第三步第四步了。這個(gè)是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會(huì)的。建議你接受一個(gè)新細(xì)胞時(shí)把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來(lái)做比較，去摸索好細(xì)胞對(duì)胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷之外，還有一個(gè)更重要的作用就是，可以程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài)，不成片不連體。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：２傳代
培養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞；２)動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因；３)有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無(wú)措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)；５)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴(yán)格無(wú)菌操作，多噴噴酒精，要是對(duì)滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套；３)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè)；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)；５)晚上離開(kāi)的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外，超凈臺(tái)是用完就開(kāi)；６)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
8402細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMCUB1細(xì)胞、BMDC細(xì)胞、WM 2664細(xì)胞
SAOS 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EO771細(xì)胞、SU.86細(xì)胞、Toledo細(xì)胞
NCTC-1469細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO-357細(xì)胞、Jeko1細(xì)胞、FRhK4細(xì)胞
COLO.205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC3細(xì)胞、RCM1細(xì)胞、NCI-1155細(xì)胞
Verda reno細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 1788細(xì)胞、H9c2(2-1)細(xì)胞、KG1A細(xì)胞
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細(xì)胞系
細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng)：１.取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問(wèn)題：凍存液的配置已是常識(shí)，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會(huì)造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。４.離心問(wèn)題：目前主要有兩種見(jiàn)解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè)，去除DMSO，去除死細(xì)胞，這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對(duì)一般人來(lái)說(shuō)，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過(guò)了活細(xì)胞會(huì)受壓過(guò)大，死亡。此外在操作過(guò)程中容易污染，所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇，結(jié)果無(wú)異常。５.細(xì)胞貼壁少的問(wèn)題：教科書(shū)中說(shuō)明凍存細(xì)胞解凍時(shí)１ml細(xì)胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問(wèn)題：試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇１管細(xì)胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過(guò)多，細(xì)胞濃度過(guò)低，不利于細(xì)胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問(wèn)題：這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問(wèn)題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會(huì)比較大，就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，從以前的資料來(lái)看，DMSO的濃度在小于０.５%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒(méi)有什么影響，還有一個(gè)說(shuō)法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。
細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣
LN 382細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-N-FI細(xì)胞、T98G細(xì)胞、HuNS1細(xì)胞
Tb 1 Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF.10A細(xì)胞、BEL 7402細(xì)胞、NHRF細(xì)胞
SKMEL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H146細(xì)胞、NCI-ADR-RES細(xì)胞、COV434細(xì)胞
HCC94細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-2218細(xì)胞、AN-3細(xì)胞、H2227細(xì)胞
SK.MEL.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Co 115細(xì)胞、HCT.116細(xì)胞、PLA801C細(xì)胞
NCIH1734細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUDHL-1細(xì)胞、NCI-H1395細(xì)胞、SW-403細(xì)胞
RPMI8402細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C-33 A細(xì)胞、MDCC MSB1細(xì)胞、Rat 1細(xì)胞
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細(xì)胞系
L540細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MES-SA/Dx5細(xì)胞、P31 FUJ細(xì)胞、RS(4;11)細(xì)胞
AAV-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P19細(xì)胞、A1847細(xì)胞、HECV細(xì)胞
RMG-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：V79-GalK1細(xì)胞、LOU-NH-91細(xì)胞、OSC-19細(xì)胞
NFHIOSE-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCM356細(xì)胞、NCI-H2029細(xì)胞、NCIH1341細(xì)胞
SNU-620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DoHH2細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞、NCIH1435細(xì)胞
Duke University 4475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM-190PT細(xì)胞、EM3細(xì)胞、CMT64細(xì)胞
T-47D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：149 PT細(xì)胞、HT115細(xì)胞、BCaP-37細(xì)胞
HOC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC 25細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞、H-2023細(xì)胞
HEL-299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EoL-1細(xì)胞、TE3A細(xì)胞、NCIH810細(xì)胞
HEL-299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EoL-1細(xì)胞、TE3A細(xì)胞、NCIH810細(xì)胞
FET細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CTLL-2細(xì)胞、N-Tera-2細(xì)胞、H-1563細(xì)胞
SMA-560細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-361細(xì)胞、801-D細(xì)胞、Tu-686細(xì)胞
MC/CAR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-2058細(xì)胞、A 72細(xì)胞、WEHI 3B細(xì)胞
C127細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：M 1細(xì)胞、PTK 1細(xì)胞、TE6細(xì)胞
NCI-H510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1755細(xì)胞、BE(2)M17細(xì)胞、BI-Mel細(xì)胞
GM04154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NE-1細(xì)胞、PC9細(xì)胞、CEL細(xì)胞
C3H10T1/2 clone8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COS-1細(xì)胞、MCF10A細(xì)胞、NCIH322細(xì)胞
MDCK Type II細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LMH細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-12F細(xì)胞、HEC-1A細(xì)胞
CCRFCEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MM-1S細(xì)胞、SR786細(xì)胞、HTori:3細(xì)胞
PNEC30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ly7細(xì)胞、FHC細(xì)胞、BCPAP細(xì)胞
F56 [Human neoplasm]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CL-11細(xì)胞、PANC-02-03細(xì)胞、TE-85 clone 5細(xì)胞
SKNEP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PG-LH7細(xì)胞、BV173細(xì)胞、HT3細(xì)胞
T84細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-2780細(xì)胞、KU 812細(xì)胞、GTL16細(xì)胞
KNS-42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P-388D1細(xì)胞、mRMEC細(xì)胞、T47-D細(xì)胞
W133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HN 4細(xì)胞、UPCISCC090細(xì)胞、Sp2/0細(xì)胞
130-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：G361-mel細(xì)胞、Pt-K2細(xì)胞、SUM 159PT細(xì)胞
EBNA-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNBE(1)細(xì)胞、QBC(939)細(xì)胞、GP5d細(xì)胞
KMB17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Verda reno細(xì)胞、CNE-2Z細(xì)胞、801-D細(xì)胞
HNE-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KOPN-8細(xì)胞、CL1.0細(xì)胞、Hepa 1-6細(xì)胞
CAL-148細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：253J-Bladder-V細(xì)胞、T-47-D細(xì)胞、COLO680N細(xì)胞
MRC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNBE-1細(xì)胞、DSL6A/C1細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞
CT26-clone 25細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRCV細(xì)胞、Hce8693細(xì)胞、SF 539細(xì)胞
LU65細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：130 T細(xì)胞、H2405細(xì)胞、SW 1573細(xì)胞
MJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RN細(xì)胞、NCI-SNU-119細(xì)胞、Jurkat-FHCRC細(xì)胞
SRA 01/04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HN4細(xì)胞、CEM-0細(xì)胞、MC38細(xì)胞
NCI N87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MGC-803細(xì)胞、MV4-11細(xì)胞、NCIH208細(xì)胞
Malme3M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1993細(xì)胞、MDCK2細(xì)胞、HEP3B2細(xì)胞
DiFi細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUDHL10細(xì)胞、MLM細(xì)胞、8305C細(xì)胞
HCC44細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH358細(xì)胞、SF295細(xì)胞、ME1細(xì)胞
BT549細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEC1-A細(xì)胞、U343MG細(xì)胞、DMS79細(xì)胞
VP303細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Huh-7細(xì)胞、COLO 205細(xì)胞、MOLP-8細(xì)胞
AKR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PA-TU S細(xì)胞、RS 4;11細(xì)胞、184A1細(xì)胞
NG108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRAEC細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞、AA-Mel細(xì)胞
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細(xì)胞系
D341細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：hFOB1.19細(xì)胞、CAL-120細(xì)胞、KASUMI6細(xì)胞
HPAF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 729細(xì)胞、SKMEL-24細(xì)胞、SNK1細(xì)胞
NCIH508細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UACC893細(xì)胞、SUM-52PE細(xì)胞、Evsa T細(xì)胞
Jiyoye細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ABC-1細(xì)胞、LNCaP C4-2細(xì)胞、3AO細(xì)胞
SW620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Granta 519細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞、Vero-76細(xì)胞
Cates-1B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BHK 21細(xì)胞、AAV-293細(xì)胞、DC 2.4細(xì)胞
LCMS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KRC-Y細(xì)胞、Tj-905細(xì)胞、CT-26細(xì)胞
SW-954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HB 611細(xì)胞、KG1細(xì)胞、PC 12細(xì)胞
UM2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Pt K1 (NBL-3)細(xì)胞、MDA-MB-435S細(xì)胞、Molm 14細(xì)胞
NCI-H1668細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NPA細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-7細(xì)胞、HOS TE85細(xì)胞
HCE-2 [50.B1]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：G-401細(xì)胞、HRA-19細(xì)胞、NCIH378細(xì)胞
GM02132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-620細(xì)胞、Dami細(xì)胞、OCI-Ly19細(xì)胞
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