作為E.coli B宿主菌,主要用來進行蛋白表達,細胞內(nèi)缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶,能夠有效避免目的蛋白的降解。
TKB1感受態(tài)細胞是BL21(DE3)衍生而來,含有酪氨酸激酶(Tyrosine Kinase)。BL21(DE3)TK感受態(tài)細胞,簡寫為TKB1,帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝,該基因的啟動子是LacUV5。
通過IPTG誘導(dǎo)表達的T7 RNA聚合酶,允許其下游目的蛋白表達,從而實現(xiàn)對下游目的蛋白的可控誘導(dǎo)型基因表達。
TKB1感受態(tài)細胞內(nèi)含有一個能有誘導(dǎo)表達酪氨酸激酶基因的質(zhì)粒(pTK)。
TKB1感受態(tài)細胞能夠轉(zhuǎn)化進去ColE1 Origin為復(fù)制起點的,包含有編碼磷酸化目的基團或者蛋白的質(zhì)粒。如果目的蛋白是構(gòu)建在一個含有親和標簽的融合表達載體上面,那么對于磷酸化蛋白的純化就會相對比較容易。
從TKB1感受態(tài)細胞中純化得到的目的蛋白,能夠用來篩選表達庫,或者親和純化和蛋白印記酪氨酸磷酸化蛋白。
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