產(chǎn)品描述

BI 2536是一種有效的Plk1抑制劑，無細胞試驗中IC50為0.83nM，比作用于Plk2和Plk3選擇性分別高4和11倍。Phase 2。

信號通路

Cell Cycle

靶點

PLK1

PLK2

PLK3

PI3Kα

Met

IC50

0.83nM

3.5nM

9.0nM

2.407μM

4.754μM

體外研究

除了Plk1，BI 2536也抑制Plk2和Plk3活性，只是抑制程度低點，IC50分別為3.5nM和9.0nM。BI 2536比一組63種其他蛋白激酶(IC50>10μM)選擇性高1000多倍。BI 2536按10nM到100nM劑量作用于HeLa細胞，抑制有絲分裂中心體中γ-微管蛋白招募和Apc6磷酸化，抑制染色體臂中釋放黏結(jié)蛋白、誘導(dǎo)產(chǎn)生單極主軸及一些依賴Plk1的其他有絲分裂過程。與作用于Plk1 RNAi效果相一致，BI 2536處理HeLa細胞，使細胞周期停在G2/M期，隨后DNA分解及凋亡，且累積斷裂的PARP p85片段，這種作用存在濃度依賴性。BI 2536抑制一組32種人腫瘤細胞系生長，EC50為2-25nM,抑制指數(shù)生長的hTERT-RPE1，人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)和正常大鼠腎臟(NRK)細胞的增殖，EC50為12-31nM。BI 2536抑制Plk1，降低甲狀腺未分化癌(ATC)細胞如CAL62、OCUT-1、SW1736、8505C和ACT-1的生長的生長和活力，EC50為1.4-5.6nM。

體內(nèi)研究

BI 2536靜脈注射給藥多種移植瘤模型，每周一次或兩次，效果都很好，通過使細胞周期停滯而抑制細胞增殖，隨后誘導(dǎo)腫瘤細胞死亡。BI 2536按50mg/kg劑量處理HCT 116移植瘤，每周一次或兩次，顯著抑制腫瘤生長，T/C分別為15%和0.3%。BI 2536每周處理兩次BxPC-3和A549模型，也顯著抑制腫瘤生長，T/C分別為5%和14%。

臨床實驗

N/A

特征

BI 2536是個有效的Plk1選擇性抑制劑，抑制Plk1的標(biāo)記。

酶活性檢測實驗

方法

重組人Plk1(1-603殘基)作為氮端，攜帶桿狀病毒表達系統(tǒng)的GST-標(biāo)記的融合蛋白通過親和層析，使用谷胱甘肽-瓊脂糖而純化。在梯度稀釋的BI 2536存在時，使用20ng重組激酶，及10μg牛奶中的酪蛋白作為底物進行Plk1酶活性實驗。在終體積為60μl的混合物(15mM MgCl₂，25mM MOPS[pH 7.0]，1mM DTT，1% DMSO，7.5mM ATP，0.3μCi γ-33P-ATP)中30℃下進行激酶反應(yīng)45分鐘。加入125μl冰凍的5% TCA終止反應(yīng)。沉淀物轉(zhuǎn)移到混合酯纖維素的多屏過濾板上，使用1% TCA沖洗實驗板，然后利用放射性進行測量。繪制劑量反應(yīng)曲線，而計算IC50值。

細胞實驗

細胞系

HeLa, A43, SKOV-3, HT-29, K562, A549, Saos-2, MCF7, HCT116, COLO 205, Hep G2, Raji, PC-3

濃度

溶于DMSO，終濃度為~1μM

處理時間

24和72小時

方法

使用不同濃度BI 2536處理細胞24和72小時。在熒光分光光度計中測量Alamar Blue染料轉(zhuǎn)換而測定細胞生長。為了測定培養(yǎng)基中DNA含量，細胞懸液在80%乙醇中混合，使用溶于PBS的0.25% Triton X-100處理5分鐘，然后與0.1% RNase和溶于PBS的10μg/ml碘化丙啶在室溫下溫育20分鐘。通過流式細胞儀分析而測定細胞周期譜。

動物實驗

動物模型

皮下注射HCT 116、NCI-H460或A549細胞的雌性BomTac：NMRI-Foxn1nu小鼠

配制

在鹽酸(0.1N)中配制，然后在0.9% NaCl中稀釋。

劑量

~50mg/kg

給藥方式

靜脈注射，每周一到兩次

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

KL6578-10mM

BI2536 (PLK抑制劑)

10mM×0.2ml

KL6578-5mg

BI2536 (PLK抑制劑)

5mg

KL6578-25mg

BI2536 (PLK抑制劑)

25mg

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說明書

1份