pET-N-GST-Thrombin-C-His

pET-N-GST-Thrombin-C-His是一種用于表達(dá)N端含GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)或C端含His標(biāo)簽(His tag)的重組蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒，也可用于表達(dá)N端含GST標(biāo)簽并且同時(shí)C端含His標(biāo)簽的重組蛋白。GST和His雙標(biāo)簽有利于通過(guò)GST柱和鎳柱兩種方法來(lái)純化目的蛋白，使目的蛋白的純度更高。本質(zhì)粒N端GST標(biāo)簽后有Thrombin酶切位點(diǎn)，可通過(guò)Thrombin蛋白酶切除N端的GST標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)GST標(biāo)簽的編碼序列，后面有一個(gè)His標(biāo)簽的編碼序列，后者含有6個(gè)組氨酸(6X His)。因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)讀碼框插入不含終止密碼子的目的基因就可以表達(dá)N端含有GST標(biāo)簽并且C端含有His標(biāo)簽的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加終止密碼子，這樣就可以表達(dá)僅在N端含有GST標(biāo)簽的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位點(diǎn)之間按照讀碼框插入不帶有終止密碼子的目的基因，這樣就可以表達(dá)僅C端帶有His標(biāo)簽的目的蛋白。
本載體在N端GST標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有Thrombin蛋白酶識(shí)別的6肽序列LVPRGS，對(duì)應(yīng)的核酸序列為CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白純化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST標(biāo)簽。Thrombin蛋白酶酶切發(fā)生在六肽序列的R和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GS。
通?？梢圆捎萌鏐eyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)、GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2262)、BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2226)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用GST抗體(AG768/AF0174)和His-tag抗體(AH367)檢測(cè)和少量地分離純化目的蛋白。
pET-N-GST-Thrombin-C-His質(zhì)粒(5955bp)的圖譜如下：

pET-N-GST-Thrombin-C-His質(zhì)粒的主要信息如下：

pET-N-GST-Thrombin-C-His的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

pET-N-GST-Thrombin-C-His中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：

pET-N-GST-Thrombin-C-His中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：

pET-N-GST-Thrombin-C-His質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息：D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt。
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