pUCm-T載體
pUCm-T載體(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR產(chǎn)物的理想載體。可以通過藍(lán)白斑篩選有插入片段的重組克隆。
很多DNA聚合酶在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)會(huì)在PCR產(chǎn)物雙鏈DNA每條鏈的3'端加上一個(gè)突出的堿基A。pUCm-T載體是一種已經(jīng)線性化的載體，載體每條鏈的3'端帶有一個(gè)突出的T。這樣，pUCm-T載體的兩端就可以和PCR產(chǎn)物的兩端進(jìn)行正確的AT配對(duì)，在連接酶的催化下，就可以把PCR產(chǎn)物連接到pUCm-T載體中，形成含有目的片段的重組載體。
M13/pUC Reverse Primer
204-221
Multiple cloning region
233-376
M13/pUC Sequencing Primer
378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
972-1832
ColE1 origin of replication(rep)
1987-2606
pUCm-T載體的圖譜如圖1：
圖1. pUCm-T載體圖譜示意圖
pUCm-T載體的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)序列如下(請(qǐng)?zhí)貏e注意其中的Pst I不是單酶切位點(diǎn))：
201
ACACAGGAAA
CAGCTATGAC
CATGATTACG
CCAAGCTTGC
ATGCCTGCAG
TGTGTCCTTT
GTCGATACTG
GTACTAATGC
GGTTCGAACG
TACGGACGTC
251
GTCGACTCTA
GACTCGAGGG
ATCCAGATCT
CCAGTCTT GA
CCTGGTCTGC
CAGCTGAGAT
CTGAGCTCCC
TAGGTCTAGA
GGTCAGA TCT
GGACCAGACG
301
AGGCGGCCGC
CCATGGGATA
TCATCGATCA
TCCGCCGGCG
GGTACCCTAT
AGTAGCTAGT
351
CGTATTACGG
TACCGAGCTC
GAATTCACTG
GCCGTCGTTT
TACAACGTCG
GCATAATGCC
ATGGCTCGAG
CTTAAGTGAC
CGGCAGCAAA
ATGTTGCAGC
pUCm-T載體中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
Afl II
Age I
Apa I
Asc I
Avr II
Bbs I
Bbv II
Bcl I
Blp I
BsaA I
BseR I
Bsg I
BsiC I
BsiW I
Bsm I
BsmF I
Bsp120 I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstB I
BstE II
BstX I
Bsu36 I
Dra III
Eco47 III
Eco72 I
Esp I
Fse I
Hpa I
Mlu I
Msc I
Mun I
Nae I
NgoM I
Nhe I
Nru I
Nsi I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
PspA I
Rsr II
Sac II
Sfi I
Sma I
SnaB I
Spe I
Spl I
Srf I
Stu I
Xca I
Xma I
pUCm-T載體中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
HinD IIIA`AGCT,T234Acc65 IG`GTAC,C360BspM IACCTGC 10/14239Asp718G`GTAC,C360Sph IG,CATG`C244Kpn IG,GTAC`C364Sal IG`TCGA,C252Ban IIG,RGCY`C370Acc IGT`MK,AC253Sac IG,AGCT`C370HinC IIGTY|RAC254Apo IR`AATT,Y372Hind IIGTY|RAC254EcoR IG`AATT,C372Xba IT`CTAG,A258Kas IG`GCGC,C533Ava IC`YCGR,G264Nar IGG`CG,CC534PaeR7 IC`TCGA,G264Ehe IGGC|GCC535Xho IC`TCGA,G264Bbe IG,GCGC`C537BamH IG`GATC,C270EcoO109 IRG`GNC,CY780BsaB IGATNN|NNATC275Aat IIG,ACGT`C841Bgl IIA`GATC,T276Ssp IAAT|ATT955Xcm ICCANNNN,N`NNNNTGG289Xmn IGAANN|NNTTC1160Tth111 IGACN`N,NGTC293Bsp1286 IG,DGCH`C1177Not IGC`GGCC,GC305Sca IAGT|ACT1279Eag IC`GGCC,G305EcoN ICCTNN`N,NNAGG1399Xma IIIC`GGCC,G305Cfr10 IR`CCGG,Y1675Dsa IC`CRYG,G312Bsa IGGTCTC 7/111694Nco IC`CATG,G312Ahd IGACNN,N`NNGTC1760Sty IC`CWWG,G312AlwN ICAG,NNN`CTG2239EcoR VGAT|ATC320Afl IIIA`CRYG,T2648Cla IAT`CG,AT325Sap IGCTCTTC 8/112765
pUCm-T載體的全序列信息： D2006 pUCm-T vector-seq.txt
pUCm-T載體是在pUC19載體的基礎(chǔ)上改造而成，除多克隆位點(diǎn)外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自連的載體轉(zhuǎn)化得到的克隆由于編碼了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈現(xiàn)藍(lán)色。大部分重組的載體，由于插入片段破壞了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上轉(zhuǎn)化得到白色克隆。這樣就可以通過藍(lán)白斑非常容易地篩選出重組克隆，藍(lán)白斑篩選結(jié)果示意圖如圖2。
圖2. pUCm-T載體的藍(lán)白斑篩選結(jié)果示意圖。pUCm-T載體和PCR產(chǎn)物片段進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化后在IPTG/X-Gal平板的上長(zhǎng)出的克隆，其中白色克隆代表PCR產(chǎn)物片段可能插入到pUCm-T載體中，但后續(xù)還需要酶切、PCR或者測(cè)序確認(rèn)。
對(duì)于重組的質(zhì)粒可以使用載體多克隆位點(diǎn)上的兩個(gè)PstI酶切位點(diǎn)進(jìn)行PstI單酶切鑒定，也可以使用廉價(jià)且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切鑒定。
構(gòu)建完成的質(zhì)?？梢酝ㄟ^質(zhì)粒上的正反兩個(gè)M13引物位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序或通過T7 promoter上的T7引物位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序。
構(gòu)建完成的質(zhì)?？梢岳肨7 RNA polymerase promoter進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，用于探針標(biāo)記等。
一個(gè)包裝的本載體共可以進(jìn)行20次連接反應(yīng)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
DNA聚合酶是否可以在PCR產(chǎn)物3'端加A需參考該DNA聚合酶的說明。對(duì)于PCR產(chǎn)物為平端的情況，不適合用于T載體的連接反應(yīng)。對(duì)于平端的PCR產(chǎn)物可以先進(jìn)行在3'端加A的反應(yīng)，再用T載體進(jìn)行克隆。
進(jìn)行PCR產(chǎn)物克隆時(shí)需自備連接、轉(zhuǎn)化等相關(guān)試劑、試劑盒。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pUCm-T載體說明書；pUCm-T載體廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾＃⒃诒本?、廣東，江西，吉林等全國30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。