| 產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
| D2006 |
pUCm-T載體 |
20次 |
253.00元 |
??????pUCm-T載體(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR產(chǎn)物的理想載體?？梢酝ㄟ^藍(lán)白斑篩選有插入片段的重組克隆。
??????很多DNA聚合酶在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)會(huì)在PCR產(chǎn)物雙鏈DNA每條鏈的3'端加上一個(gè)突出的堿基A。pUCm-T載體是一種已經(jīng)線性化的載體，載體每條鏈的3'端帶有一個(gè)突出的T。這樣，pUCm-T載體的兩端就可以和PCR產(chǎn)物的兩端進(jìn)行正確的AT配對(duì)，在連接酶的催化下，就可以把PCR產(chǎn)物連接到pUCm-T載體中，形成含有目的片段的重組載體。
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pUCm-T載體的主要信息如下:
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Base pairs
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2773
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Lac Z promoter
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142-171
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M13/pUC Sequencing Primer
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204-221
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Lac Z
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222-534
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Multiple cloning region
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233-376
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M13/pUC Reverse Primer
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378-395
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Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
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972-1832
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ColE1 origin of replication(rep)
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1987-2606
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??????pUCm-T載體的圖譜如圖1：
圖1. pUCm-T載體圖譜示意圖
??????pUCm-T載體的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)序列如下(請(qǐng)?zhí)貏e注意其中的Pst I不是單酶切位點(diǎn))：
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??Lac Z
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201
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ACACAGGAAA
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CAGCTATGAC
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CATGATTACG
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CCAAGCTTGC
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ATGCCTGCAG
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TGTGTCCTTT
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GTCGATACTG
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GTACTAATGC
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GGTTCGAACG
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TACGGACGTC
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Xba I Xho I BamH I Bgl II
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251
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GTCGACTCTA
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GACTCGAGGG
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ATCCAGATCT
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CCAGTCTT?GA
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CCTGGTCTGC
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CAGCTGAGAT
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CTGAGCTCCC
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TAGGTCTAGA
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GGTCAGA?TCT
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GGACCAGACG
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Pst I Not I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
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301
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AGGCGGCCGC
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CCATGGGATA
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TCATCGATCA
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TCCGCCGGCG
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GGTACCCTAT
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AGTAGCTAGT
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Kpn I Sac I EcoR I
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351
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CGTATTACGG
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TACCGAGCTC
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GAATTCACTG
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GCCGTCGTTT
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TACAACGTCG
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GCATAATGCC
|
ATGGCTCGAG
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CTTAAGTGAC
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CGGCAGCAAA
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ATGTTGCAGC
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??????pUCm-T載體中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
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Afl II
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Age I
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Apa I
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Asc I
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Avr II
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Bbs I
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Bbv II
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Bcl I
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Blp I
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BsaA I
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BseR I
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Bsg I
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BsiC I
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BsiW I
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Bsm I
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BsmF I
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Bsp120 I
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BspM II
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BsrG I
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BssH II
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Bst1107 I
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BstB I
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BstE II
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BstX I
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Bsu36 I
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Dra III
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Eco47 III
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Eco72 I
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Esp I
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Fse I
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Hpa I
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Mlu I
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Msc I
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Mun I
|
Nae I
|
NgoM I
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Nhe I
|
Nru I
|
Nsi I
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PflM I
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Pme I
|
Pml I
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PpuM I
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PspA I
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Rsr II
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Sac II
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Sfi I
|
Sma I
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SnaB I
|
Spe I
|
Spl I
|
Srf I
|
Stu I
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Xca I
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Xma I
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??????pUCm-T載體中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
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HinD III
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A`AGCT,T
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234
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Acc65 I
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G`GTAC,C
|
360
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BspM I
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ACCTGC 10/14
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239
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Asp718
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G`GTAC,C
|
360
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Sph I
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G,CATG`C
|
244
|
Kpn I
|
G,GTAC`C
|
364
|
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Sal I
|
G`TCGA,C
|
252
|
Ban II
|
G,RGCY`C
|
370
|
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Acc I
|
GT`MK,AC
|
253
|
Sac I
|
G,AGCT`C
|
370
|
|
HinC II
|
GTY|RAC
|
254
|
Apo I
|
R`AATT,Y
|
372
|
|
Hind II
|
GTY|RAC
|
254
|
EcoR I
|
G`AATT,C
|
372
|
|
Xba I
|
T`CTAG,A
|
258
|
Kas I
|
G`GCGC,C
|
533
|
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Ava I
|
C`YCGR,G
|
264
|
Nar I
|
GG`CG,CC
|
534
|
|
PaeR7 I
|
C`TCGA,G
|
264
|
Ehe I
|
GGC|GCC
|
535
|
|
Xho I
|
C`TCGA,G
|
264
|
Bbe I
|
G,GCGC`C
|
537
|
|
BamH I
|
G`GATC,C
|
270
|
EcoO109 I
|
RG`GNC,CY
|
780
|
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BsaB I
|
GATNN|NNATC
|
275
|
Aat II
|
G,ACGT`C
|
841
|
|
Bgl II
|
A`GATC,T
|
276
|
Ssp I
|
AAT|ATT
|
955
|
|
Xcm I
|
CCANNNN,N`NNNNTGG
|
289
|
Xmn I
|
GAANN|NNTTC
|
1160
|
|
Tth111 I
|
GACN`N,NGTC
|
293
|
Bsp1286 I
|
G,DGCH`C
|
1177
|
|
Not I
|
GC`GGCC,GC
|
305
|
Sca I
|
AGT|ACT
|
1279
|
|
Eag I
|
C`GGCC,G
|
305
|
EcoN I
|
CCTNN`N,NNAGG
|
1399
|
|
Xma III
|
C`GGCC,G
|
305
|
Cfr10 I
|
R`CCGG,Y
|
1675
|
|
Dsa I
|
C`CRYG,G
|
312
|
Bsa I
|
GGTCTC 7/11
|
1694
|
|
Nco I
|
C`CATG,G
|
312
|
Ahd I
|
GACNN,N`NNGTC
|
1760
|
|
Sty I
|
C`CWWG,G
|
312
|
AlwN I
|
CAG,NNN`CTG
|
2239
|
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EcoR V
|
GAT|ATC
|
320
|
Afl III
|
A`CRYG,T
|
2648
|
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Cla I
|
AT`CG,AT
|
325
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Sap I
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GCTCTTC 8/11
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2765
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??????pUCm-T載體的全序列信息：?D2006 pUCm-T vector-seq.txt
??????pUCm-T載體是在pUC19載體的基礎(chǔ)上改造而成，除多克隆位點(diǎn)外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
??????少量自連的載體轉(zhuǎn)化得到的克隆由于編碼了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈現(xiàn)藍(lán)色。大部分重組的載體，由于插入片段破壞了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上轉(zhuǎn)化得到白色克隆。這樣就可以通過藍(lán)白斑非常容易地篩選出重組克隆，藍(lán)白斑篩選結(jié)果示意圖如圖2。
??????圖2. pUCm-T載體的藍(lán)白斑篩選結(jié)果示意圖。pUCm-T載體和PCR產(chǎn)物片段進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化后在IPTG/X-Gal平板的上長出的克隆，其中白色克隆代表PCR產(chǎn)物片段可能插入到pUCm-T載體中，但后續(xù)還需要酶切、PCR或者測(cè)序確認(rèn)。
??????對(duì)于重組的質(zhì)?？梢允褂幂d體多克隆位點(diǎn)上的兩個(gè)PstI酶切位點(diǎn)進(jìn)行PstI單酶切鑒定，也可以使用廉價(jià)且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切鑒定。
??????構(gòu)建完成的質(zhì)?？梢酝ㄟ^質(zhì)粒上的正反兩個(gè)M13引物位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序或通過T7 promoter上的T7引物位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序。
??????構(gòu)建完成的質(zhì)粒可以利用T7 RNA polymerase promoter進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，用于探針標(biāo)記等。
??????一個(gè)包裝的本載體共可以進(jìn)行20次連接反應(yīng)。
包裝清單：
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產(chǎn)品編號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
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|
D2006
|
pUCm-T載體
|
20μl
|
|
—
|
說明書
|
1份
|
保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
??????DNA聚合酶是否可以在PCR產(chǎn)物3'端加A需參考該DNA聚合酶的說明。對(duì)于PCR產(chǎn)物為平端的情況，不適合用于T載體的連接反應(yīng)。對(duì)于平端的PCR產(chǎn)物可以先進(jìn)行在3'端加A的反應(yīng)，再用T載體進(jìn)行克隆。
??????進(jìn)行PCR產(chǎn)物克隆時(shí)需自備連接、轉(zhuǎn)化等相關(guān)試劑、試劑盒。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。