pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)
pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)是信裕生物自行研發(fā)的一種用于microRNA(miRNA)等研究的螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒。該質(zhì)?？捎糜诎涯康幕虻?'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到其多克隆位點(diǎn)，然后在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高靈敏度地檢測(cè)特定microRNA(miRNA)或其它非編碼RNA等對(duì)該基因3'-UTR或其它靶序列調(diào)控活性的報(bào)告基因質(zhì)粒。
螢光素、螢光素酶、螢火蟲(chóng)螢光素酶和海腎螢光素酶也經(jīng)常被稱(chēng)作熒光素、熒光素酶、螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶。
pGL6-miR以信裕生物的pGL6質(zhì)粒為模板，具有氨芐青霉素抗性，并在螢火蟲(chóng)螢光素酶基因之后添加了多克隆位點(diǎn)，便于插入目的基因的3'-UTR或其它適當(dāng)?shù)陌行蛄小?br />
pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到螢光素酶基因(luc2)的下游，轉(zhuǎn)染細(xì)胞并檢測(cè)螢光素酶的表達(dá)。如果細(xì)胞內(nèi)源或外源表達(dá)的miRNA與靶序列結(jié)合，通常會(huì)抑制螢光素酶的翻譯或促進(jìn)mRNA的降解，從而使螢光素酶的表達(dá)量減少。因此通過(guò)本報(bào)告基因質(zhì)粒檢測(cè)螢光素酶的表達(dá)水平，可以檢測(cè)內(nèi)源或外源表達(dá)的miRNA是否對(duì)插入的靶序列有調(diào)控作用。并且可以通過(guò)靶序列中預(yù)測(cè)的miRNA結(jié)合位點(diǎn)的突變，用于比較突變前后螢光素酶表達(dá)水平的變化。如果預(yù)測(cè)的miRNA位點(diǎn)突變后，miRNA的調(diào)控作用消失，則基本上說(shuō)明突變的位點(diǎn)就是miRNA在靶序列中具體的結(jié)合位點(diǎn)。
pGL6-miR帶有中低等強(qiáng)度的PGK啟動(dòng)子，有利于檢測(cè)miRNA等對(duì)于螢火蟲(chóng)螢光素酶表達(dá)水平的下調(diào)作用，即當(dāng)miRNA的抑制作用較弱時(shí)也能檢測(cè)到。并且PGK啟動(dòng)子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母細(xì)胞中都可以發(fā)揮作用。
pGL6-miR質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
luc2 reporter gene
549-2202
Multiple cloning region
2208-2261
SV40 late poly（A） sinal
2268-2512
SV40 early enhancer/promoter
2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region
2998-3792
Synthetic poly(A) signal
3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region
4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site
5945-6097
pGL6-miR質(zhì)粒圖譜如下：
pGL6-miR質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下(請(qǐng)?zhí)貏e注意其中的NheI不是單酶切位點(diǎn))：
2169
AGGCCAAGAA
GGGCGGCAAG
ATCGCCGTGT
TCCGGTTCTT
CCCGCCGTTC
TAGCGGCACA
BamHI EcoRV XhoI SacI MluI BglII HindIII
2220
GGATCCGATA
TCCTCGAGGA
GCTCACGCGT
AGATCTAAGC
CCTAGGCTAT
AGGAGCTCCT
CGAGTGCGCA
TCTAGATTCG
pGL6-miR中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括：
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
Bsa I
BsaA I
BsiW I
BssH II
Eco72 I
EcoR I
Nde I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
PspA I
Rsr II
Sam I
SnaB I
Spl I
Srf I
Tth111 I
Vsp I
Xcm I
pGL6-miR中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括：
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
Sal I
G`TCGA,C
3881
BspM II
T`CCGG,A
445
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
3472
BsaB I
GATNN|NNATC
997
Xba I
T`CTAG,A
3796
BsrG I
T`GTAC,A
1040
BsiC I
TT`CG,AA
3867
Dra III
CAC,NNN`GTG
1696
BstB I
TT`CG,AA
3867
Acc65 I
G`GTAC,C
2209
ApaL I
G`TGCA,C
4445
Asp718
G`GTAC,C
2209
Ple I
GAGTC 9/10
4510
Kpn I
G,GTAC`C
2213
HgiE II
ACCNNNNNNGGT -1/13
4710
BamH I
G`GATC,C
2221
Not I
GC`GGCC,GC
4951
EcoR V
GAT|ATC
2229
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
4975
PaeR7 I
C`TCGA,G
2233
Pst I
C,TGCA`G
4975
Xho I
C`TCGA,G
2233
BstE II
G`GTNAC,C
4978
Sac I
G,AGCT`C
243
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
5053
Mlu I
A`CGCG,T
2245
Bsu36 I
CC`TNA,GG
5409
Bgl II
A`GATC,T
2251
Pvu I
CG,AT`CG
5423
HinD III
A`AGCT,T
2257
Sac II
CC,GC`GG
5447
Apo I
R`AATT,Y
2361
Bst1107 I
GTA|TAC
5563
Mun I
C`AATT,G
2425
Xca I
GTA|TAC
5563
pGL6-miR質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
pGL6-miR的全序列信息：D2106 pGL6-miR-seq.txt
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
KL-2106-1μg
pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)
1μg
KL-2106-100μg
pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)
100μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)說(shuō)明書(shū)；pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專(zhuān)營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。