??????pGL6-miR (報(bào)告基因質(zhì)粒)是碧云天自行研發(fā)的一種用于microRNA(miRNA)等研究的螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒。該質(zhì)?？捎糜诎涯康幕虻?'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到其多克隆位點(diǎn)，然后在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高靈敏度地檢測(cè)特定microRNA(miRNA)或其它非編碼RNA等對(duì)該基因3'-UTR或其它靶序列調(diào)控活性的報(bào)告基因質(zhì)粒。
??????螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶。
??????pGL6-miR以碧云天的pGL6質(zhì)粒為模板，具有氨芐青霉素抗性，并在螢火蟲螢光素酶基因之后添加了多克隆位點(diǎn)，便于插入目的基因的3'-UTR或其它適當(dāng)?shù)陌行蛄小?br> ??????pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到螢光素酶基因(luc2)的下游，轉(zhuǎn)染細(xì)胞并檢測(cè)螢光素酶的表達(dá)。如果細(xì)胞內(nèi)源或外源表達(dá)的miRNA與靶序列結(jié)合，通常會(huì)抑制螢光素酶的翻譯或促進(jìn)mRNA的降解，從而使螢光素酶的表達(dá)量減少。因此通過(guò)本報(bào)告基因質(zhì)粒檢測(cè)螢光素酶的表達(dá)水平，可以檢測(cè)內(nèi)源或外源表達(dá)的miRNA是否對(duì)插入的靶序列有調(diào)控作用。并且可以通過(guò)靶序列中預(yù)測(cè)的miRNA結(jié)合位點(diǎn)的突變，用于比較突變前后螢光素酶表達(dá)水平的變化。如果預(yù)測(cè)的miRNA位點(diǎn)突變后，miRNA的調(diào)控作用消失，則基本上說(shuō)明突變的位點(diǎn)就是miRNA在靶序列中具體的結(jié)合位點(diǎn)。
??????pGL6-miR帶有中低等強(qiáng)度的PGK啟動(dòng)子，有利于檢測(cè)miRNA等對(duì)于螢火蟲螢光素酶表達(dá)水平的下調(diào)作用，即當(dāng)miRNA的抑制作用較弱時(shí)也能檢測(cè)到。并且PGK啟動(dòng)子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母細(xì)胞中都可以發(fā)揮作用。
??????pGL6-miR質(zhì)粒的主要信息如下：

??????pGL6-miR質(zhì)粒圖譜如下：

??????pGL6-miR質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下(請(qǐng)?zhí)貏e注意其中的NheI不是單酶切位點(diǎn))：

??????pGL6-miR中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括：

??????pGL6-miR中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括：

??????pGL6-miR質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
??????Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
??????Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
??????pGL6-miR的全序列信息：D2106 pGL6-miR-seq.txt
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??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
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