RNase Inhibitor

RNase Inhibitor (Ribonuclease Inhibitor)，即RNases抑制劑，是一種大腸桿菌重組表達的人胎盤核糖核酸酶抑制劑
(human placental RNase inhibitor)，可以通過非競爭性方式按1:1比例和RNase A、RNase B、RNase C和人胎盤核糖核酸酶(human placental RNase)結(jié)合，并抑制這些酶的活性，從而保護RNA不被這些酶降解。
RNase Inhibitor對RNase A、RNase B、RNase C和人胎盤核糖核酸酶的抑制能力極強，其Ki值低至約為4×10^-14M。通?？贵w和抗原的親和常數(shù)僅為10^-6-10^-9M。并且RNase Inhibitor和這些RNA酶的結(jié)合是非?？焖俚?，幾乎在加入的瞬間就會和這
些RNA酶形成復(fù)合物從而抑制其酶活性。
RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2、CL3、RNase from Aspergillus、S1 Nuclease、Taq DNA
polymerase、M-MLV reverse transcriptase和SP6、T7、T3 RNA polymerase的的酶活性。
RNase Inhibitor在pH 5-8范圍內(nèi)保持其RNA酶抑制活性，在pH 7-8時抑制活性最高。RNase Inhibitor維持其活力需要至少在溶液中含有1mM DTT。
本產(chǎn)品與Thermo公司的RiboLock RNase Inhibitor以及Promega公司的RNasin Ribonuclease Inhibitor屬于同類產(chǎn)品，都是重組表達的人胎盤核糖核酸酶抑制劑，對于RNase的抑制效果也完全相同(參考圖1和圖2)。

氧釩核糖核苷復(fù)合物(RNase抑制劑)

氧釩核糖核苷復(fù)合物(Ribonucleoside Vanadyl Complexes, RVC)是一種常用的核糖核酸酶(ribonucleases, RNase)抑制劑，即RNA酶抑制劑，濃度為200mM，廣泛用于各種RNA樣品的分離純化和檢測過程中以抑制RNA降解。
本產(chǎn)品通過一種優(yōu)化的方法將四種rNTP的等摩爾混合物與氧化釩混合反應(yīng)而成，可以和RNase以非共價鍵結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而抑制RNase活性。
本產(chǎn)品是一種常用的RNase抑制劑，可廣泛用于各種需要防止RNA降解的RNA分離、純化和檢測過程。本產(chǎn)品可以用于mRNA的純化過程中，作為RNase的抑制劑；也可用于細(xì)胞裂解和蔗糖梯度法細(xì)胞組分分離過程中，以抑制RNase活性；還可以用于原位雜交中保護RNA探針，以及DNase I消化DNA時保護RNA等。
本產(chǎn)品可以抑制絕大多數(shù)核糖核酸酶，但以下是例外：DNase I、S1 nuclease及Bacillus cereus ribonuclease。由于本產(chǎn)品不抑制DNase I，所以當(dāng)用DNase I消化去除RNA樣品中的DNA時，可以采用本產(chǎn)品來抑制RNase。
本產(chǎn)品不適合用于體外翻譯體系。
有報道稱0.4mM以上濃度的RVC對PCR聚合酶有一定的抑制作用，所以本試劑不推薦直接用于反轉(zhuǎn)錄體系中，反轉(zhuǎn)錄體系中可以選用信裕生物的另外一種RNase抑制劑(R0102)。也可以通過后續(xù)提到的方法抽提去除RVC后再用于PCR反應(yīng)。
很多時候RNA樣品中的RVC不必去除，可以直接用于后續(xù)的電泳、功能檢測等。例如，使用本產(chǎn)品純化獲得的mRNA未經(jīng)去除RVC，可以直接用于蛙卵的注射實驗。
如果需要去除RNA樣品中的RVC，可以直接使用等體積苯酚進行抽提。如果苯酚中含有抗氧化劑8-羥基(8-
hydroxyquinoline)，抽提含有RVC的RNA樣品后會發(fā)現(xiàn)苯酚的顏色會變黑。當(dāng)苯酚抽提樣品2-4次后，苯酚的顏色不再明顯變色，提示RVC已經(jīng)被充分去除了。也可以在RNA沉淀前，加入RVC的摩爾數(shù)10倍量的EDTA以充分分解和失活RVC，這樣可以在RNA沉淀時去除已經(jīng)分解和失活的RVC。
RVC濃度越高，對于RNase的抑制效果越強。參考圖1，20mM的RVC可以完全抑制0.00025U/ml的RNase A。本產(chǎn)品濃度為200mM，一般細(xì)胞裂解液中推薦使用終濃度20mM，也可以根據(jù)經(jīng)驗或文獻選擇不同的濃度。每一批的本產(chǎn)品都經(jīng)過RNase活性抑制的檢測，檢測結(jié)果參考圖1。

圖1. 不同濃度的RVC對RNase A的抑制效果圖?？俁NA和0.00025U/ml RNase A以及指定濃度的RVC一起孵育20分鐘后進行電泳檢測。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測條件，實際獲得的結(jié)果可能和上圖有所差別。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事項：
次使用時建議分裝，避免反復(fù)凍融。
去垢劑SDS以及螯合劑EDTA可以抑制RVC的活性，請勿和RVC同時使用。 
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

圖1. 信裕生物的RNase Inhibitor和同類產(chǎn)品(Competitor RNase Inhibitor)對RNase A酶活性的抑制效果比較。5μg yeast RNA與0或2ng RNase A及8、4、2、1或0U RNase Inhibitor，在100μl的反應(yīng)體系(50mM MOPS, 5mM MgCl₂, pH6.5)中，37℃孵育15分鐘。反應(yīng)完畢后立即取20μl反應(yīng)液用1%瓊脂糖凝膠進行電泳分析。

圖2. 信裕生物的RNase Inhibitor和同類產(chǎn)品(Competitor RNase Inhibitor)對RNase A的酶活性的抑制效果比較。2μg Hela細(xì)胞總RNA與0或0.5ng RNase A及20、10、5、2.5、1.25、0.625或0U RNase Inhibitor，在20μl的反應(yīng)體系(50mM MOPS, 5mM MgCl₂, pH6.5)中，37℃孵育15分鐘。反應(yīng)完畢后立即全部用1%瓊脂糖凝膠進行電泳分析。

用途：用于cDNA合成，體外轉(zhuǎn)錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護RNA不被降解；還可用于特定RNase活性的鑒定等。
來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為human placenta中編碼該酶的基因。
分子量：約49.6 kDa(單體)。
活性定義：將能夠抑制5ng RNase A的50%活性的酶量定義為一個活性單位。
活性檢測條件：100mM Tris-HCl (pH7.5), 1.2mM EDTA, 0.1mg/ml BSA, 100ng/ml RNase A, 0.1mg/ml E.coli [3H]-
RNA, 50mg/ml yeast RNA, 8mM DTT。
純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶。
儲存溶液：20mM HEPES-NaOH (pH7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘可以導(dǎo)致完全失活。70℃加熱10分鐘仍會有微量活性殘留。SDS和尿素等導(dǎo)致蛋白變性的試劑
以及對氯汞基苯甲酸鹽(p-chloromercuribenzoate)、等氧化劑會抑制RNase Inhibitor與RNA酶的結(jié)合。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
酶儲存溶液中加入DTT可保證RNase Inhibitor長期貯存的穩(wěn)定性。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 對于cDNA合成、體外轉(zhuǎn)錄、體外翻譯等常見的反應(yīng)體系中，為保護其中的RNA不被RNase降解，RNase Inhibitor推薦用量為最終濃度1-2U/μl。