??????氧釩核糖核苷復(fù)合物(Ribonucleoside Vanadyl Complexes, RVC)是一種常用的核糖核酸酶(ribonucleases, RNase)抑制劑,即RNA酶抑制劑,濃度為200mM,廣泛用于各種RNA樣品的分離純化和檢測過程中以抑制RNA降解。 ??????本產(chǎn)品通過一種優(yōu)化的方法將四種rNTP的等摩爾混合物與氧化釩混合反應(yīng)而成,可以和RNase以非共價鍵結(jié)合,形成穩(wěn)定的復(fù)合物,從而抑制RNase活性。 ??????本產(chǎn)品是一種常用的RNase抑制劑,可廣泛用于各種需要防止RNA降解的RNA分離、純化和檢測過程。本產(chǎn)品可以用于mRNA的純化過程中,作為RNase的抑制劑;也可用于細(xì)胞裂解和蔗糖梯度法細(xì)胞組分分離過程中,以抑制RNase活性;還可以用于原位雜交中保護(hù)RNA探針,以及DNase I消化DNA時保護(hù)RNA等。 ??????本產(chǎn)品可以抑制絕大多數(shù)核糖核酸酶,但以下是例外:DNase I、S1 nuclease及Bacillus cereus?ribonuclease。由于本產(chǎn)品不抑制DNase I,所以當(dāng)用DNase I消化去除RNA樣品中的DNA時,可以采用本產(chǎn)品來抑制RNase。 ??????本產(chǎn)品不適合用于體外翻譯體系。 ??????有報道稱0.4mM以上濃度的RVC對PCR聚合酶有一定的抑制作用,所以本試劑不推薦直接用于反轉(zhuǎn)錄體系中,反轉(zhuǎn)錄體系中可以選用碧云天的另外一種RNase抑制劑(R0102)。也可以通過后續(xù)提到的方法抽提去除RVC后再用于PCR反應(yīng)。 ??????很多時候RNA樣品中的RVC不必去除,可以直接用于后續(xù)的電泳、功能檢測等。例如,使用本產(chǎn)品純化獲得的mRNA未經(jīng)去除RVC,可以直接用于蛙卵的注射實(shí)驗(yàn)。 ??????如果需要去除RNA樣品中的RVC,可以直接使用等體積苯酚進(jìn)行抽提。如果苯酚中含有抗氧化劑8-羥基喹啉(8- hydroxyquinoline),抽提含有RVC的RNA樣品后會發(fā)現(xiàn)苯酚的顏色會變黑。當(dāng)苯酚抽提樣品2-4次后,苯酚的顏色不再明顯變色,提示RVC已經(jīng)被充分去除了。也可以在RNA沉淀前,加入RVC的摩爾數(shù)10倍量的EDTA以充分分解和失活RVC,這樣可以在RNA沉淀時去除已經(jīng)分解和失活的RVC。 ??????RVC濃度越高,對于RNase的抑制效果越強(qiáng)。參考圖1,20mM的RVC可以完全抑制0.00025U/ml的RNase A。本產(chǎn)品濃度為200mM,一般細(xì)胞裂解液中推薦使用終濃度20mM,也可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或文獻(xiàn)選擇不同的濃度。每一批的本產(chǎn)品都經(jīng)過RNase活性抑制的檢測,檢測結(jié)果參考圖1。
保存條件: ??????-20℃保存,至少一年有效。 注意事項(xiàng): ??????次使用時建議分裝,避免反復(fù)凍融。 ??????去垢劑SDS以及螯合劑EDTA可以抑制RVC的活性,請勿和RVC同時使用。? ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 相關(guān)產(chǎn)品:
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