一步法鼠基因型鑒定試劑盒

信裕生物生產(chǎn)的一步法鼠基因型鑒定試劑盒，即One-step genotyping assay kit for rodents，是一種特別便捷的使用鼠血樣品一步法直接進行PCR，從而實現(xiàn)鼠基因型快速鑒定的試劑盒。無須抽提基因組DNA，血液樣品可以直接用于PCR。并且PCR結(jié)束后可以直接上樣電泳，無需添加上樣緩沖液。
本試劑盒采用了耐血的HemoTaq™ DNA聚合酶，這是一種經(jīng)過基因工程改造的非常高效的適用于EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝血樣品或干血斑樣品直接PCR檢測的耐熱DNA聚合酶，確保了本試劑盒可以快速便捷地用于鼠基因型鑒定。
對于全血樣品可以直接PCR檢測，無須提取DNA。本產(chǎn)品對小鼠、大鼠等全血中血紅素等各種PCR抑制劑表現(xiàn)出超強的抗性，對于新鮮采集的、4℃保存或低溫凍存EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝的人或小鼠血液樣品或者干血斑(如whatman903或FTA采血卡上的干血斑)，都無需進行DNA提取純化，可以直接用于PCR擴增目的DNA。
所需血樣少，耐血能力高。本產(chǎn)品用于20μl的PCR擴增體系時，通常僅加入約1μl抗凝全血即可順利完成PCR檢測。20μl的PCR擴增體系中加入的血液量可以達到4μl，即20%體積，但通常建議使用1μl血液樣品。
兼容EDTA、肝素或檸檬酸鈉三種常見抗凝血。血液樣品用于PCR檢測時，EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝血都可以兼容的。如果希望取得的檢測效果，優(yōu)先推薦EDTA抗凝血。因為EDTA可以螯合多種核酸酶發(fā)揮酶活性所必須的金屬離子，從而可以更好地抑制核酸的降解。
本試劑盒提供了一對陽性對照引物，便于確認PCR檢測效果。該對引物是一種小鼠、大鼠和人的通用引物，可以擴增小鼠、大鼠或人基因組DNA中β-actin基因的300bp DNA片段。
本產(chǎn)品的耐血體積百分比可以達到20-50%，但推薦血液用量為5%。本產(chǎn)品用于肝素、檸檬酸鈉和EDTA抗凝血PCR檢測的效果參考圖1。圖中可見，本產(chǎn)品對肝素(heparin)、檸檬酸鈉和EDTA處理的全血的耐受體積百分比可以達到50%、20%和30%。盡管本產(chǎn)品有很好的耐血效果，實際使用時先的推薦血液用量為5%。實際使用時，可能會因為高血脂等異常血液，導(dǎo)致血液用量加大，從而會存在PCR效果下降的風(fēng)險。
圖1. 信裕生物生產(chǎn)的一步法鼠基因型鑒定試劑盒擴增圖中所示不同抗凝劑采集的抗凝全血中目的基因的電泳效果圖。使用一步法鼠基因型鑒定試劑盒及本試劑盒提供的Control primer mix，在PCR體系中直接加入5-50%不同體積百分比的不同抗凝劑采集的抗凝血，用于擴增-actin基因的300bp DNA片段后的電泳效果圖。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
本產(chǎn)品中含有的HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)的保真性和Taq DNA聚合酶相近，因此本產(chǎn)品建議主要用于血液檢測目的。如果目的是為了克隆特定基因，推薦使用D7243S/M HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)或者D7287S/M Easy-Load™ Blood Direct PCR Master Mix (HF, 2X)。
本產(chǎn)品可以輕松擴增長達5kb的目的片段。本產(chǎn)品可以輕松擴增長達5kb的目的片段。本產(chǎn)品擴增不同長度目的基因的效果參考圖2。圖中可見，本產(chǎn)品以檸檬酸鈉抗凝全血為模板可以直接PCR擴增出長達5kb的DNA片段。
圖2. 信裕生物生產(chǎn)的一步法鼠基因型鑒定試劑盒直接以10%檸檬酸鈉抗凝全血為模板擴增不同長度的目的基因的效果圖。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands)); 1,β-actin (300bp); 2, CCR5 (630bp); 3, CCR5 (1100bp); 4, CCR5 (2000bp); 5, IL-6 (2841bp); 6, IL-6 (4171bp); 7, IL-6 (4882bp)。
本產(chǎn)品擴增獲得的PCR產(chǎn)物帶有3'-dA overhangs的粘性末端，可直接用于和T載體連接進行TA克隆。
本產(chǎn)品如果用于20微升的PCR反應(yīng)體系，兩種包裝的本產(chǎn)品分別足夠用于100個和500個反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。適當(dāng)避免反復(fù)凍融。
注意事項：
由于PCR反應(yīng)非常靈敏，在使用一步法鼠基因型鑒定試劑盒時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。
抗凝血的推薦用量為PCR體系總體積的5%左右，可以直接添加到PCR體系中，無需進行任何額外處理。
PCR反應(yīng)結(jié)束之后，建議3000-5000g離心3-5min以沉淀血細胞碎片，便于吸取上清用于電泳分析等。注意：由于抗凝血本身的原因，PCR結(jié)束后在PCR管底部會出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象。
需自備Nuclease-Free Water。推薦選購信裕生物生產(chǎn)的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。