檢測(cè)原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。特異性抗小鼠 IL-12 p70抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和生物素化的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的 IL-12 p70與固相抗體和檢測(cè)抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm波長(zhǎng)(參考校正波長(zhǎng)540nm或570nm)測(cè)定吸光度值。

檢測(cè)類型：雙抗夾心法

形式：預(yù)包被96孔板

檢測(cè)樣本類型：細(xì)胞上清液，血清，血漿

上樣量：100ul

試劑盒組分：

預(yù)包被96孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、抗小鼠 IL-12 p70檢測(cè)抗體、稀釋用緩沖液、顯色液（A、B）、洗滌液、終止液、SA-HRP、封板膜和說(shuō)明書(shū)一份。

靈敏度：2.24 pg/mL

檢測(cè)范圍：39.1 - 2,500 pg/mL

回收率范圍：83-107%

保存方法：2-8℃

標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

背景：

白細(xì)胞介素 12（IL-12， 也稱 NKSF）， 是 70-75kDa 的異源二聚體糖蛋白， 屬于 IL-12異源二聚體細(xì)胞因子家族。 IL-12 由 35 kDa(p35)和 40 kDa(p40) 的兩個(gè)亞基構(gòu)成，這兩個(gè)亞基由二硫鍵相連， 相互間無(wú)氨基酸序列同源性。 成熟的 p35 亞基有 196 個(gè)氨基酸， 包含七個(gè)半胱氨酸及一個(gè)潛在的 N-連接糖基化位點(diǎn)。 成熟的小鼠 p35 與人和大鼠的氨基酸同源性分別為 63%和 86%。 成熟的小鼠 p40 亞基長(zhǎng) 313個(gè)氨基酸， 包括 13 個(gè)半胱氨酸和 5 個(gè)潛在的 N-連接糖基化位點(diǎn)。 有研究報(bào)道 p40 序列具有多態(tài)性， 但 R&D systems 的這個(gè) IL-12 p70 試劑盒不識(shí)別這些等位基因產(chǎn)物。

成熟的小鼠 p40 和人及大鼠的氨基酸同源性分別為 72%和 93%。 雖然 p35類似于促紅細(xì)胞生成素的配體， 但 p40 更類似促紅細(xì)胞生成素受體的 N-端， 有 WSXWS結(jié)構(gòu)域、 一個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和四個(gè)保守的半胱氨酸。 這表明 IL-12 可能是細(xì)胞因子受體模擬物， 類似于 IL-6/可溶性 IL-6R 復(fù)合物。 值得注意的是 p40可以以單體或同源二聚體形式存在， 而 p35 卻從來(lái)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)單體形式。 p40 是白介素 23（IL-23） 兩個(gè)亞基中較大的亞基。 雖然 IL-12 一直被認(rèn)為是一種分泌型分子， 人們?cè)谌撕托∈蠹?xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了膜結(jié)合型 IL-12。 產(chǎn)生 IL-12 的細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、 樹(shù)突狀細(xì)胞、 單核細(xì)胞、 朗格漢斯細(xì)胞、 中性粒細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、 類漿樹(shù)突狀細(xì)胞、 小膠質(zhì)細(xì)胞、 CD8+ DC（僅小鼠細(xì)胞）和非生發(fā)中心的（CD38-CD44+） B 細(xì)胞（僅人體細(xì)胞）。

小鼠 IL-12 的高親和力受體是由至少 2 個(gè) I 型跨膜糖蛋白組成， 類似于細(xì)胞因子受體超家族成員。 個(gè)亞基（Rβ1） 為 100 kDa， 以 Kd= 1nM 與 IL-12 結(jié)合。 這個(gè)受體是 p40 亞基的主要結(jié)合位點(diǎn)； 第二個(gè)亞基（Rβ2） 為 130 kDa， 與 Rβ1亞基無(wú)氨基酸同源性。 這個(gè)受體是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要組成部分， 作為一個(gè)二硫鍵相連的 p30-p40 二聚體的附著點(diǎn)。 如上所述， 小鼠 p40 以單體、 二聚體形式存在， 或于 p35 結(jié)合形成 IL-12， 或于 p19 結(jié)合形成 IL-23。 同源二聚體 p40 和 IL-23 都可以結(jié)合 IL-12R， 作為不傳遞信號(hào)的拮抗劑。 或者 p40同源二聚體也可以與 Rβ1 結(jié)合， 激活小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。從功能上而言， IL-12 已被證明能夠增強(qiáng)細(xì)胞毒性、 誘導(dǎo) NK 細(xì)胞、 T 細(xì)胞和樹(shù)突狀表皮 T 細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素。 有報(bào)道表明， IL-12 能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素。 與 IL-23 和 IL-27 等其 IL-12 的家族成員一起， IL-12 能促進(jìn) CD4+ Th1 型免疫反應(yīng)的進(jìn)展。 作為感染應(yīng)答， IL-27 最先分泌， 促進(jìn) TH0 向 THR0/1 過(guò)度，隨后分泌 IL-12， 產(chǎn)生 Th1 效應(yīng)細(xì)胞。 與 IL-18、 IL-12 一起產(chǎn)生把效應(yīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化 Th1 記憶細(xì)胞， 接著這些細(xì)胞被 IL-23 激活。