DNase I
DNase I，即Deoxyribonuclease I，中文名稱為脫氧核糖核酸酶I，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物，5'端為磷酸基團，3'端為羥基。
DNase I活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。
特點：不含RNase(RNase free)，可以用于各種RNA樣品的處理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
用途：制備不含DNA的RNA樣品；RT-PCR反應(yīng)前RNA樣品中去除基因組DNA等可能的DNA污染；體外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板； DNase I footprinting研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；缺口平移(nick
translatioin)；產(chǎn)生DNA隨機片段文庫；細胞凋亡TUNEL檢測中部分剪切基因組DNA作為陽性對照。
來源：從牛胰腺純化得到。
分子量：約32kDa(單體)。
活性定義：37℃10分鐘內(nèi)，將能夠完全降解1μg pBR322質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
純度：不含其它DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶。
酶儲存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
失活或抑制：加入EDTA至終濃度為2.5mM后，65℃加熱10分鐘可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNase I有顯著抑制作用。
包裝清單：
XY-7073-1
DNase I，RNase-free(1U/μl)
200U
XY-7073-2
Reaction Buffer(10X)
0.2ml
XY-7073-3
EDTA(25mM)
0.2ml
保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
酶使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. RT-PCR反應(yīng)前RNA樣品中DNA的去除：
a. DNA模板限制性核酸內(nèi)切酶作用后線性化。酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量的無菌去離子水中。
b. 向一無RNA酶的EP管中依次加入下列試劑：
Reaction Buffer (10X)
1μl
補充經(jīng)DEPC處理的去離子水
至9μl
注意：如需處理較大量的RNA樣品，可以按照比例放大上述反應(yīng)體系。如果能在上述反應(yīng)體系中加入適量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解則更佳。
c. 37℃孵育30分鐘。
d. 向上述反應(yīng)體系中加入1μl 25mM EDTA，65℃孵育10分鐘以失活DNase I。注意：在沒有鏊合劑如EDTA等存在情況下加熱，RNA可被水解。
e. 上述加熱處理過的RNA樣品即可直接用于處理好的RNA可用作RT-PCR反應(yīng)的模板。
2. 體外RNA反轉(zhuǎn)錄后模板DNA的去除：
a. 在每含有0.5μg模板DNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中加入1U DNase I。注意：在某些情況下，模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通過實驗進行摸索。
b. 37℃ 孵育15分鐘。
c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。
3. 缺口平移進行DNA標記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I
2.5μl
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP) *
1.25μl
[α-32P]-dNTP, ～110TBq/mmol (3000Ci/mmol)
1.85-3.7MBq (50-100μCi)
DNase I (freshly diluted to 0.002U/μl)**
1μl
DNA Polymerase I, E.coli
0. 5-1.5μl (5-15U)
* 3 dNTP Mixture(1mM each, without the labeled dNTP)：分別取除已經(jīng)標記的dNTP外的3種dNTP(100mM)各1μl加入到97μl 的無核酸酶的去離子水中混勻即可。例如標記的為dATP，則需混合dTTP、dCTP和dGTP三種dNTP至每種的最終濃度為
1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以備后續(xù)使用。
** DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I進行稀釋。
Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。
b. 立即15℃孵育15～60分鐘。
c. 上述反應(yīng)體系中加入1μl of 0.5M EDTA(pH 8.0)終止反應(yīng)。
d. 從中取出少量例如1μl檢測標記效率。通常標記效率至少可以達到108cpm/μg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP，以純化獲得標記的DNA。
4. 其它用途可以參考上述用途進行。
關(guān)鍵字： DNase I說明書；DNase I廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學，分子生物學等高生物產(chǎn)品。總部位于上海，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學院，上海中醫(yī)藥大學，華東師范大學，第二軍醫(yī)大學，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。