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細胞氧化應(yīng)激的定量評價方法大致分做三類:
1)測定由活性氧修飾的化合物;
2)測定活性氧消除系統(tǒng)酶和抗氧化物質(zhì)的量;
3)測定含有轉(zhuǎn)錄因子的氧化應(yīng)激指示物。
進一步尚有:
1)生物體內(nèi)氧化應(yīng)激的程度足以產(chǎn)生應(yīng)答;
2)活體內(nèi)難以蓄積;
3)在活體內(nèi)不是被代謝,而是穩(wěn)定存在,等等。理解這些要點對于臨床普及推廣都很有用。
細胞增殖-毒性檢測實驗操作步驟
是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。下面以engreen的CCK8試劑盒為例,簡要說明細胞增殖-毒性檢測的操作步驟
方法/步驟
在96孔板中配制100μl的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時 (在 37℃,5% CO2 的條件下)。
向培養(yǎng)板加入 10μl 不同濃度的待測物質(zhì)。
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液(engreen) (注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化 。
細胞周期檢測的原理:
PI法是經(jīng)典的周期檢測方法。PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合,其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系,用流式細胞儀進行分析,就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài),從而計算出各個期的百分含量。PI染色后,假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復(fù)制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。
常用的細胞染色方法有:
1.簡單染色法,常用堿性染料如美藍等進行簡單染色;
2.革蘭氏染色法,主要包括結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復(fù)染四個過程;
3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍組成;
4.吉姆薩染色法,吉姆薩染色原理與結(jié)果和瑞特染色法基本相同;
5.細胞免疫熒光染色法,免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合。
蛋白提取/定量
蛋白提取頻道,提供蛋白提取實驗用蛋白提取試劑盒,蛋白裂解液,蛋白濃度測定試劑盒等蛋白質(zhì)實驗用試劑及耗材。其中蛋白提取系列包括:植物蛋白提取試劑盒,細胞組織蛋白提取試劑盒,胞膜/細胞核蛋白提取試劑盒,全蛋白提取試劑盒等。
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上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品。總部位于上海,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。