真菌總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品專門用于快速提取微量酵母蛋白用于 SDS-PAGE 凝膠電泳和 Western 印跡分析。本產(chǎn)品結(jié)合玻璃珠破壁和化學(xué)法破壁兩種方法，適合于 各種形態(tài)的各種酵母材料。本產(chǎn)品的其主要特點(diǎn)是：
1. 破壁效率高，能達(dá)到 80-90%。
2. 可以處理各種酵母樣品。
3. 操作簡單，得到的裂解液可以直接用于 SDS-PAGE 和 Western 印跡分 析。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 50 次小紙盒包裝
溶液 A LM81202a 100 mL
溶液 B 成分一 LM81202b1 50 mL
溶液 B 成分二 LM81202b2 1.5 g
酸洗玻璃珠，400μm LM100307C 5 g
使用手冊 LM81202sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸保存，但溶液 B 成分二需-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 酵母培養(yǎng)基
使用方法準(zhǔn)備工作：將溶液 B 成分二（干粉）全部加到 50 mL 溶液 B 成分一中，充分搖晃使之全部溶解，成為溶液 B，然后分裝成小份（體積根據(jù)每次實驗的樣品數(shù)決定）并放-20℃長期保存。
1、 將酵母細(xì)胞接種到 5 mL YPD 培養(yǎng)基中，30℃搖晃（250rpm/分鐘）過夜培養(yǎng)使其 OD600 達(dá)到 0.5～2.0。
2、 把酵母細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到裝有 2 mL 預(yù)冷溶液 A 的 10-15 mL 離心管中，混勻。
3、 4℃ 5000g 離心 5 分鐘沉淀酵母細(xì)胞，吸出上清液。
4、 用 30 μL 溶液 B 懸浮酵母細(xì)胞，并快速轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。
5、 100℃下保溫 3 分鐘，使蛋白酶失活，樣品存放于-20℃。
6、 加入 0.1g 的玻璃珠。
7、 在旋渦振蕩器上劇烈振蕩混合 2-10 分鐘。
8、 加入 70 μL 溶液 B，稍加振蕩，置 100℃保溫 1 分鐘。
9、 取 5-20 μL 抽提液上樣直接進(jìn)行 SDS-PAGE 凝膠電泳。
注：若蛋白濃度較高，細(xì)胞破裂后可用多余溶液 B 適當(dāng)稀釋后再電泳。
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